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多药耐药菌的耐药机制研究

作　者: 慕福芹
导　师: 赵立勋; 肖春玲
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 耐药机制外排泵外膜蛋白 β-内酰胺酶整合子
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

研究目的探讨一株从水产养殖鲍鱼的病体中分离得到的多药耐药的摩氏摩根菌的耐药机制。明确该多药耐药菌株对相关药物耐药的具体机制,为以该菌株作为模式菌建立全细胞模型、筛选新型抗多药耐药菌活性的药物或药物先导物提供理论和技术支持。研究内容和方法本研究主要采用两条设计思路：第一条思路是应用现有的文献或数据来验证该菌株是否存在常见的细菌耐药机制。主要的内容包括：采用96孔板微量MH培养基稀释法测定29种抗生素对该多药耐药菌株的最低抑菌浓度(MIC)；β-内酰胺酶相关实验；整合子基因检测；标准菌与耐药株的外膜蛋白差异分析；外排泵相关实验。第二条思路是应用转座子插入突变法,探索摩氏摩根菌中存在的新的耐药机制。研究结果该菌株对20种抗生素耐受水平明显高于标准菌,表明该菌株为多药耐药菌。头孢菌素酶(AmpC)三维实验阳性,同时通过PCR从该菌株的基因组中扩增出摩氏摩根菌的ampC结构基因,表明该菌株中有AmpC酶的产生；I类整合子引物PCR扩增检测呈阳性,其所携带的耐药基因为氨基糖苷类(aad)的耐药基因和氯霉素类(catB3)的耐药基因；外排泵的相关实验结果表明其不存在AcrAB外排泵；外膜蛋白的相关实验结果表明该多药耐药菌株与标准菌株的外膜蛋白存在着差异表达,但是否是该菌的耐药机制仍需进一步验证。通过转座子插入突变法得到一株突变株,并通过反式PCR得到转座子插入位点两侧的序列,但是否介导该菌的耐药机制仍需进一步验证。

全文目录

目录  4-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
引言  10-12
材料与方法  12-28
  一、实验材料  12-16
  二、实验方法  16-28
    1 耐药菌的筛选与鉴定  16-18
    2 耐药株与标准株摩氏摩根菌药敏实验  18-19
    3 外排泵相关实验  19-21
    4 β-内酰胺酶实验  21-24
    5 整合子相关实验  24
    6 外膜蛋白相关实验  24-28
结果与讨论  28-58
  一、实验结果  28-55
    1 耐药菌株的筛选与鉴定  28-36
    2 耐药摩氏摩根菌bxg-zu与标准菌对不同抗菌药物的敏感性比较  36-38
    3 外排泵相关实验结果  38-40
    4 β-内酰胺酶实验结果  40-46
    5 整合子实验结果  46-50
    6 外膜蛋白相关实验结果  50-55
  二、讨论  55-58
    1 药敏实验结果提示  55
    2 外排泵相关实验  55
    3 β-内酰胺酶相关实验结果讨论  55-56
    4 整合子的意义  56
    5 外膜蛋白研究中存在的问题  56-58
结论  58-60
转座子随机插入法查找耐药基因  60-82
  材料和方法  61-72
    一、实验材料  61-63
    二、实验方法  63-72
      1 阳性突变菌株的获得  63-67
      2 插入位点分析  67-72
  结果和讨论  72-81
    一、实验结果  72-80
      1 转座子插入阳性的突变菌  72
      2 插入位点分析结果  72-80
    二、讨论  80-81
  结论  81-82
参考文献  82-85
分子生物学方法在细菌耐药机制研究中的应用  85-92
致谢  92

多药耐药菌的耐药机制研究

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