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现代色谱及其联用技术对中药有效成分进行多维表征的方法学研究

作　者: 陈怡
导　师: 吴玉田；范国荣
学　校: 第二军医大学
专　业: 药物分析学
关键词: 生物碱香豆素木脂素高效液相色谱法-二极管阵列检测-串联质谱全二维液相色谱法加压毛细管电色谱法亲和整体毛细管电色谱法多维表征
分类号: R284
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

从天然产物中提取的生物碱、香豆素、木脂素类化合物均具有抗癌、抗炎、抗微生物、抗真菌、抗病毒、逆转肿瘤多药耐药、抗HIV、抗氧化等作用,对CYP450酶的抑制作用也影响着内源性物质和外源性药物的代谢。本文以中药复杂体系中存在的生物碱、香豆素、木脂素类化合物为研究对象,建立了现代色谱及其联用技术对其有效部位进行化学成分和生物学活性多维表征的方法。采用高效液相色谱法-二极管阵列检测-串联质谱,全二维液相色谱法,加压毛细管电色谱法,对中药莲子心中的生物碱,蛇床子中的香豆素,五味子中的木脂素,白芷中的香豆素进行了化学成分的指纹分析和质量控制的表征;采用亲和整体毛细管电色谱法,对生物碱类化合物与α1-酸性糖蛋白和牛血清白蛋白的相互作用进行了初步评价,基于与效应蛋白作用的生物学活性的差异进行了毛细管电色谱法的表征。研究成果可为中药质量控制的现代化研究和中药代谢产物研究提供研究方法的模版和技术平台。

全文目录

摘要  4-9
中文摘要  9-12
ABSTRACT  12-17
前言  17-27
  1 中药质量控制现状  17-18
  2 中药质量控制方法  18-21
    2.1 常规色谱法  18-19
    2.2 现代色谱法  19-20
      2.2.1 现代色谱及其联用技术  19-20
      2.2.2 微柱分离技术  20
    2.3 生物色谱法  20-21
  3 生物碱、香豆素及木脂素研究概况  21-22
  4 本研究课题的设计与思路  22-24
  参考文献  24-27
第一章采用高效液相色谱法－串联质谱对莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的分离、鉴定和快速测定  27-45
  1.1 前言  27-28
  1.2 仪器、材料与试剂  28-29
  1.3 药材提取与粗提物的制备  29-30
  1.4 采用分析型 LC-DAD-MS/MS 对莲子心中三种主要生物碱进行分离与在线质谱初步鉴定  30-36
    1.4.1 色谱及质谱条件  30
      1.4.1.1 色谱条件  30
      1.4.1.2 质谱条件  30
    1.4.2 采用ESI-MS/MS 进行流动注射分析  30-33
    1.4.3 LC-DAD-MS/MS 分离分析与物质的初步确定  33-36
  1.5 采用制备型LC 进行莲子心中三种主要生物碱的制备  36-37
    1.5.1 色谱条件  36-37
    1.5.2 单体制备  37
  1.6 采用LC-MS/MS 进行莲子心粗提物的快速定量  37-41
    1.6.1 色谱条件  37
    1.6.2 质谱条件  37-38
    1.6.3 溶液配制  38
    1.6.4 方法学考察  38-39
    1.6.5 莲子心粗提物莲心总碱与酚性总碱中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量测定  39-41
  1.7 讨论与小结  41
  参考文献  41-45
第二章采用高效液相色谱法－串联质谱对蛇床子进行指纹图谱分析  45-62
  2.1 前言  45-48
  2.2 仪器、材料与试剂  48-49
  2.3 样品制备  49
  2.4 指纹分析与表征  49-57
    2.4.1 色谱条件  49
    2.4.2 质谱条件  49
    2.4.3 指纹图谱中光谱和质谱信息的共同表征  49-51
    2.4.4 二级质谱结构推断  51-57
  2.5 蛇床子的综合表征并与其它伞形科和芸香科植物的相互比较  57-58
  2.6 讨论与小结  58-59
  参考文献  59-62
第三章全二维液相色谱法分析五味子中木脂素类化合物  62-99
  3.1 前言  62-65
  3.2 全二维液相色谱仪的搭建及其分离条件  65-66
  3.3 材料与试剂  66-67
  3.4 样品的提取  67
  3.5 一维柱分离条件的筛选  67-69
  3.6 采用全二维液相色谱对十三个来源的五味子进行化学成份表征  69-82
  3.7 采用离线质谱法对五味子化学成分进行归属  82-89
    3.7.1 质谱条件  82
    3.7.2 五味子成分归属  82-89
  3.8 讨论与小结  89-97
  参考文献  97-99
第四章采用加压毛细管电色谱法对白芷中香豆素类化合物进行分离和定量分析  99-123
  4.1 前言  99-101
  4.2 仪器  101-102
    4.2.1 加压毛细管电色谱仪的改造  101-102
    4.2.2 分析用高效液相色谱仪及其色谱条件  102
  4.3 材料与试剂  102-103
  4.4 毛细管色谱柱的填充  103-104
  4.5 样品的制备及标准溶液的配制  104
  4.6 加压毛细管电色谱的分离条件  104-113
    4.6.1 流动相的选择  104-108
    4.6.2 电解质溶液的选择  108-109
      4.6.2.1 离子强度的影响  108-109
      4.6.2.2 pH 值的影响  109
    4.6.3 运行电压的影响  109-111
    4.6.4 优化后的分离条件  111-112
    4.6.5 pCEC 的方法评价  112-113
  4.7 加压毛细管电色谱(pCEC)、毛细管液相色谱(CLC)、高效液相色谱(HPLC)分离效能的比较  113-114
  4.8 pCEC 对白芷粗提物中香豆素的定量分析  114-118
  4.9 讨论与小结  118-120
  参考文献  120-123
第五章采用亲和整体毛细管电色谱法对药物－蛋白相互作用的考察  123-147
  5.1 前言  123-127
  5.2 材料与试剂  127
  5.3 仪器及分离条件  127-128
  5.4 毛细管亲和整体柱的制备  128-134
    5.4.1 毛细管预处理  128
    5.4.2 甲基丙烯酸缩水甘油酯－乙二醇二甲基丙烯酸酯整体固定相的制备及表征  128-132
      5.4.2.1 整体固定相的制备  128-129
      5.4.2.2 毛细管整体柱的光镜和电镜表征  129-132
    5.4.3 α1－酸性糖蛋白和牛血清白蛋白毛细管生物色谱柱的制备及表征  132-134
      5.4.3.1 毛细管生物色谱柱的制备  132-133
      5.4.3.2 毛细管生物色谱柱的表征  133-134
  5.5 样品的配制  134-135
  5.6 样品的分离  135-138
  5.7 采用超滤法－高效液相色谱测定药物与蛋白结合率和结合常数  138-141
    5.7.1 蛋白溶液和样品溶液的配制  138
    5.7.2 色谱条件  138
    5.7.3 蛋白结合率测定  138-141
  5.8 讨论与小结  141-143
  参考文献  143-147
结语  147-152
致谢  152-154
攻读博士学位期间发表论文目录  154-157
附录  157-162

现代色谱及其联用技术对中药有效成分进行多维表征的方法学研究

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