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乙型肝炎病毒表面抗原转基因鼠肝脏差异蛋白质组学研究及其意义

作　者: 赵超
导　师: 闻玉梅；袁正宏；马张妹；陆豪杰
学　校: 复旦大学
专　业: 病原生物学
关键词: 差异蛋白质组学 乙型肝炎病毒 乙肝表面抗原 转基因鼠 代谢 胆固醇 亲环素A
分类号: R373
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)人群感染率高，除急性感染外容易引起慢性化，并可导致肝硬化和肝细胞肝癌等一系列肝脏损害及疾病。HBV慢性化的一个主要标志是其表面抗原(Hepatitis B surface antigen，HBsAg)在宿主血清中持续存在超过6个月。持续表达的HBsAg成为慢性乙肝的重要标志，但HBsAg的致病机制尚未被完全揭示。因此，阐明慢性HBV感染的致病机制和清除HBsAg对宿主的影响，一直是人们所关心的问题。为研究HBsAg持续表达对宿主的影响，本研究第一部分选择用来自我国患者的HBV毒株基因组建立的转基因鼠及对照鼠为模型，运用差异蛋白质组学方法，分析了HBsAg阳性鼠的肝脏蛋白表达谱，并鉴定出93个差异表达的蛋白。对鉴定出的蛋白进行功能分类，发现接近45％的差异蛋白属于物质和能量代谢相关的酶类。HBsAg构成的HBV包膜含有大量脂质，其中约25％是宿主细胞来源的脂类，最近研究发现宿主脂类水平会影响到HBsAg的表达，因此，我们推测持续大量表达的HBsAg也会影响宿主脂类代谢，继而影响到其他物质代谢。在本研究第二部分中，结合HBsAg转基因鼠基因差异表达谱的研究结果，对转基因鼠肝脏蛋白差异表达谱结果中代谢相关的蛋白进行分析，将HBsAg对宿主代谢通路的影响归纳为以下三个方面：1．胆固醇合成途径增强，其代谢去路中胆汁酸合成途径减弱；2．糖酵解途径减弱，糖异生途径增强；3．氨基酸分解代谢增强。为证实HBsAg对宿主代谢途径的影响和其结果，对转基因鼠血清部分相关的临床生化指标测定和分析。结果发现，由于HBsAg形成的HBV包膜对宿主肝细胞脂质的大量消耗，动物血脂水平的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白均下降，而氨基酸倾向分解代谢以保障必要的能量供给。HBsAg影响宿主肝脏物质代谢途径和水平，一方面损害了宿主的正常生理活动，成为乙肝慢性化的病理生理学基础；另一方面，上述变化也可能是支持HBsAg大量表达和分泌的基础。本研究第三部分选取了一个具有重要功能的差异蛋白——亲环素A(cyclophilin A，CypA)进行验证和研究，旨在阐明其在HBsAg致病过程中的潜在意义。在小鼠肝脏和HBsAg稳定表达的细胞系中验证了HBsAg引起细胞内CypA下降的现象，这一结论也被RNA干扰实验结果所印证。另外，免疫共沉淀实验和序列分析证实HBsAg和CypA存在相互作用。在CypA对HBsAg表达影响的研究中发现，干扰RNA降低细胞内CypA含量能促进HBsAg分泌，过表达外源CypA却抑制HBsAg分泌。初步结果显示，在部分HBsAg阳性的临床肝脏标本中CypA含量下降。对此现象机制的研究发现，HBsAg引起细胞内CypA含量下降，不是通过基因转录水平的改变，而是促进了后者的分泌。最新研究报道，分泌的CypA具有趋化中性粒细胞和淋巴细胞，促进炎症反应的功能。通过转基因鼠肝脏HE染色，观察到少量视野存在炎性细胞浸润，是否可能是HBsAg通过促进CypA分泌介导慢性炎症反应还需进一步证实。本研究揭示了，(1)在乙肝慢性感染中HBsAg通过改变宿主代谢通路水平利于自身表达和分泌，损害了宿主的正常生理活动，成为乙肝慢性致病的病理生理学基础；(2)HBsAg通过促进CypA分泌，可能会介导炎性细胞浸润，产生慢性炎症反应；并通过调控细胞内CypA含量介导自身正反馈分泌机制。通过这些发现，提出了HBsAg潜在的新致病机制，为深入研究奠定了基础。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-10
第一部分 运用二维电泳和质谱联用研究乙肝病毒转基因小鼠肝脏差异蛋白表达谱  10-32
  引言  10-11
  材料和方法  11-19
  结果  19-25
  讨论  25-27
  结论  27-28
  参考文献  28-32
第二部分 乙肝病毒表面抗原对转基因小鼠肝脏物质代谢的影响  32-46
  引言  32-33
  材料和方法  33-34
  结果  34-41
  讨论  41-43
  结论  43-44
  参考文献  44-46
第三部分 乙肝病毒表面抗原与细胞蛋白亲环素 A关系的研究  46-70
  引言  46-47
  材料和方法  47-53
  结果  53-64
  讨论  64-66
  结论  66-67
  参考文献  67-70
论文总结  70-72
文献综述 亲环素 A功能及其致病作用的研究进展  72-93
附录一 用原核细胞系统表达和半定量乙型肝炎病毒的逆转录酶蛋白  93-102
附录二 学术活动、论文发表及获奖情况  102-104
致谢  104-105
论文附表  105-133

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 人体病毒学（致病病毒）
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