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抗人脑胶质瘤重组免疫毒素SZ39（ScFv）-PE40及人源化抗CD3单链抗体在大肠杆菌中的表达

作　者: 罗良生
导　师: 黄强
学　校: 苏州大学
专　业: 神经外科
关键词: 人脑胶质瘤单链抗体融合蛋白免疫毒素绿脓杆菌外毒素包涵体基因重组复性
分类号: R739.41
类　型: 博士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

本研究在已经克隆并表达了抗人脑胶质瘤单链抗体SZ39-ScFv的基础上,构建了抗人脑胶质瘤重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40,并在大肠杆菌中得到了高效的表达,初步证实其具有结合胶质瘤细胞SHG-44的活性,为进一步研究开发抗胶质瘤重组免疫毒素打下了基础;另外,本研究还构建并原核表达了人源化抗CD3单链抗体,为进一步构建抗CD3/抗胶质瘤双特异性抗体作了必要的准备工作。第一部分人源化抗CD3单链抗体的构建和表达目的:在以前的工作中,我们通过化学偶联的方法制备了抗CD3/抗胶质瘤双特异性抗体,并在体外细胞毒试验及荷瘤动物实验中取得了较好结果,但存在着分子量大、制备困难等缺点。本实验构建并表达了人源化抗CD3单链抗体,旨在为构建新一代的小分子、高效的基因重组抗CD3/抗胶质瘤双特异性抗体提供一个合适的构件。方法:从质粒pZZ3中克隆出人源化抗CD3抗体的VH、VL基因,并经测序证实;分别与编码Linker即(Gly4Ser)3的基因连接,构建出人源化抗CD3单链抗体基因,分别将其克隆入大肠杆菌融合表达载体pGEX-5X-1及分泌型表达载体pET20b(+)中,并分别转化大肠杆菌BL21(DE3)及BL21(DE3)pLysS。经IPTG诱导表达,以12% SDS-PAGE分析表达产物,以Western blot证实。结果:SDS-PAGE分析表明经融合表达载体pGEX-5X-1表达的融合蛋白分子量为55KD,经pET20b(+)表达的产物分子量为35KD,分别与其理论推算值相符。表达形式均以包涵体为主,表达量均占菌体总蛋白的30%左右。Western blot证实诱导后菌体总蛋白分别在55KD和35KD处出现特异性显色印迹。结论:人源化抗CD3单链抗体可以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达。第二部分抗人脑胶质瘤重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40的基因构建及表达目的:构建抗人脑胶质瘤重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40并在大肠杆菌中表达。方法:从质粒pVC85中克隆出PE40基因,与抗胶质瘤单链抗体SZ39-ScFv基因进行拼接,构建出重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40基因,并将其克隆于表达载体pET20b(+),在大肠杆菌Bl21(DE3)pLysS

全文目录

英文缩写  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-11
第一部分人源化抗 CD3 单链抗体在大肠杆菌中的表达  11-25
第二部分抗人脑胶质瘤重组免疫毒素 SZ39(ScFv)-PE40 基因的构建及表达  25-39
第三部分重组免疫毒素 SZ39(ScFv)-PE40 在大肠杆菌中的GST 融合表达  39-45
第四部分重组免疫毒素 SZ39(ScFv)-PE40 的分离、纯化及变性、复性的初步研究  45-52
附录：一般材料与方法  52-56
综述：基因重组免疫毒素的研究进展  56-67
致谢  67

抗人脑胶质瘤重组免疫毒素SZ39（ScFv）-PE40及人源化抗CD3单链抗体在大肠杆菌中的表达

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