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藻毒素Microcystin-LR的体内及体外遗传毒性实验研究

作　者: 詹立
导　师: 吴德生
学　校: 四川大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 微囊藻毒素MCLR 遗传毒性致突变 TK基因转基因小鼠基因芯片
分类号: R114
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

研究背景:藻类大量繁殖爆发大面积水华释放的藻毒素对环境的污染及人类健康的危害已成为世界很多地区较为严重的公共卫生问题。由铜绿微囊藻属产生的环形七肽微囊藻毒素（Microcystin-LR, MCLR）具有较强的肝脏毒性及促癌性。目的:研究MCLR体内及体外遗传毒性并探讨其可能的作用机制。方法:（Ⅰ）应用人类淋巴母细胞TK6研究MCLR的体外遗传毒性。在4h及24h染毒细胞后,分别进行细胞毒性试验、微核试验、TK基因突变试验。分离自发及MCLR诱发tk基因缺失突变体并分析杂和性丢失现象。（Ⅱ）应用转基因小鼠(Muta^TMMouse)研究MCLR的体内遗传毒性。连续4周染毒后检测小鼠肝脏、肺脏转基因lacZ及cⅡ突变频率及观察是否诱发外周血微核产生。同时检测MCLR是否具有协同致癌剂DEN诱发突变的作用。分析cⅡ基因突变频谱可研究MCLR致突变的分子特征。（Ⅲ）应用基因芯片Atlas^TMGlass Human1.0 cDNA Microarray系统研究MCLR对TK6细胞1090基因表达谱的影响。结果:（Ⅰ） 4h体外染毒实验结果为阴性,而MLCR染毒TK6细胞24h后,随作用剂量的增加tk位点突变频率明显升高,最高浓度组（80μg/ml）诱发tk基因突变率是对照组的5.1倍,该浓度组同时诱发微核产生。以自发突变及MCLR（80μg/ml）诱发突变细胞基因组DNA为PCR反应模板,进行杂和性丢失（LOH）的分析结果显示MCLR诱导产生半合子LOH比例（41.7%）几乎是对照（20.7%）两倍。

全文目录

缩略语对照  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-17
  前言参考文献  14-17
第一部分微囊藻毒素MCLR的体外遗传毒性及其机制的研究  17-56
  实验一人类淋巴母细胞TK6检测环磷酰胺诱发微核及tk基因突变的实验研究  18-26
  实验二 TK6细胞检测环磷酰胺诱导tk基因杂和性丢失(LOH)的实验研究  26-36
  实验三微囊藻毒素MCLR诱发TK6细胞遗传毒性的体外实验研究  36-43
  实验四微囊藻毒素MCLR对人类淋巴母细胞TK6遗传毒性分子机理的探讨  43-48
  第一部分参考文献  48-56
第二部分微囊藻毒素MCLR的体内遗传毒性及其机制的研究  56-93
  实验一 λ／lacZ转基因小鼠(Muta~(TM)Mouse)检测二乙基亚硝胺诱发微核及lacZ基因突变的实验研究  57-64
  实验二转基因小鼠检测DEN诱导cⅡ基因突变及其分子机制实验研究  64-75
  实验三微囊藻毒素MCLR对λ／lacZ转基因小鼠体内遗传毒性的实验研究  75-85
  实验四微囊藻毒素MCLR协同二乙基亚硝胺(DEN)诱导λ／lacZ转基因小鼠微核及基因突变的实验研究  85-89
  第二部分参考文献  89-93
第三部分微囊藻毒素对TK6细胞基因表达水平影响的实验研究  93-102
  实验一微囊藻毒素MCLR作用TK6细胞基因表达谱变化的研究  94-100
  第三部分参考文献  100-102
总结  102-103
综述转基因鼠在致突变研究中的应用  103-110
综述参考文献  110-115
个人简历  115-117
致谢  117-118

藻毒素Microcystin-LR的体内及体外遗传毒性实验研究

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