学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

应用基因芯片技术鉴别检测动物源性成分

作　者: 石丰运
导　师: 宗卉；张利平
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 动物源性 16SrRNA基因基因芯片检测
分类号: TS251.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 83次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

含有动物源性成分的饲料和畜禽肉食品是疯牛病、禽流感、甲型流感等疾病的主要传播途径。目前,国内外对于饲料中动物源性成分检测方法的报道主要有显微镜检、红外光谱、ELISA、PCR等,但这些方法存在检测要求检验人员有丰富的操作经验、通量小、易产生假阳性结果等缺点,不适应当前高通量饲料和肉食品的大规模同时检测的发展趋势。需要建立一种更快速、准确和经济的方法,而基因芯片检测法正是一种可以满足这些要求的方法。本文旨在建立一种使用一对通用引物结合基因芯片技术对动物源性成分进行快速、简便、特异且低成本的检测动物源性成分的方法,保证进出口动物源性饲料和肉食品的安全。本研究通过对脊椎动物分子标记基因进行序列分析,选择线粒体DNA(mtDNA) 16S rRNA基因为目标基因,利用一对通用引物,在该引物扩增区间设计了16条特异性基因芯片检测探针及2条质控探针用于对牛、山羊、绵羊、水牛、鹿、驴、猪、狗、兔、鸡、鸭、鹅、鹌鹑、火鸡、鸵鸟、鱼等16种动物源性成分进行检测。通过对PCR扩增体系及杂交体系的优化,确定探针点样浓度为40μmol/L、杂交温度为52℃、杂交时间为2 h,各探针间无交叉反应。该检测方法能实现对上述16种动物源性成分同时进行快速、准确地检测,具有很好的特异性,灵敏度均达到10 pg,建立了16种动物源性基因芯片检测方法。该基因芯片检测技术将为我国进出口饲料及肉食品鉴别检测提供新的检测方法和技术支持。利用本方法对5份已知阳性饲料样本进行检测,检测结果均呈阳性,与常规PCR结果符合率达100%。对8份未知样品进行检测,结果与常规PCR结果符合率达100%。本研究建立了一种快捷、特异、灵敏且稳定地检测动物源性基因芯片检测方法,可以应用于检测进出口动物源性饲料中是否含有动物源性成分,也可以推广至对动物产品的检测,将有效防止疯牛病、禽流感、甲型流感等疾病进入我国,保证国家安全和人民健康,保护食品和饲料工业的发展。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-5
英文缩略词表  5-9
第一章文献综述  9-22
  1.1 研究的背景及意义  9-10
  1.2 动物源性成分的检测方法  10-16
    1.2.1 显微镜检测法  10-11
    1.2.2 近红外光谱法  11
    1.2.3 免疫学方法  11-12
    1.2.4 DNA分析方法  12-16
  1.3 动物线粒体DNA的研究进展  16-18
    1.3.1 动物线粒体DNA的基本特征  16-17
    1.3.2 线粒体DNA在分子生物学中的应用  17-18
  1.4 基因芯片技术的研究进展  18-21
    1.4.1 基因芯片的概念  18
    1.4.2 常见基因芯片的种类  18-19
    1.4.3 基因芯片的原理  19-20
    1.4.4 基因芯片技术在检测方面的优势和应用  20-21
    1.4.5 基因芯片存在的问题及其应用前景  21
  1.5 研究的目的、意义及创新之处  21-22
第二章动物源性基因芯片的制备  22-29
  2.1 材料  22-23
    2.1.1 样品  22
    2.1.2 主要试剂  22
    2.1.3 主要仪器及试验设备  22-23
  2.2 方法  23-24
    2.2.1 引物的设计与合成  23
    2.2.2 探针的设计与合成  23-24
    2.2.3 动物源性基因芯片的制备  24
  2.3 结果与分析  24-27
    2.3.1 动物源性基因芯片通用引物  24-25
    2.3.2 动物源性基因芯片探针  25-26
    2.3.3 基因芯片的布阵  26-27
  2.4 讨论  27-29
    2.4.1 引物和探针的设计  27-28
    2.4.2 基因芯片的设计  28-29
第三章动物源性基因芯片杂交体系的建立  29-37
  3.1 材料  29-30
    3.1.1 样品  29
    3.1.2 试剂  29
    3.1.3 仪器设备  29-30
  3.2 方法  30-34
    3.2.1 动物源性杂交试验  30-33
    3.2.2 杂交体系的优化  33-34
  3.3 结果与分析  34-35
    3.3.1 基因芯片探针点样浓度的优化  34
    3.3.2 基因芯片杂交时间的优化  34
    3.3.3 基因芯片杂交液浓度的优化  34-35
    3.3.4 基因芯片杂交温度的优化  35
  3.4 讨论  35-37
第四章动物源性基因芯片的初步应用  37-46
  4.1 材料  37
    4.1.1 样品  37
    4.1.2 试剂  37
    4.1.3 仪器设备  37
  4.2 方法  37-39
    4.2.1 动物肉粉DNA的提取  37-38
    4.2.2 动物源性模板DNA的质量检测  38
    4.2.3 动物源性基因芯片杂交试验  38-39
  4.3 结果与分析  39-42
    4.3.1 碱基掺入法PCR扩增结果  39
    4.3.2 动物源性基因芯片特异性检测  39-40
    4.3.3 动物源性基因芯片灵敏度检测  40-41
    4.3.4 动物源性基因芯片重复性与稳定性检测  41
    4.3.5 饲料和肉食品样品的检测  41-42
  4.4 讨论  42-46
    4.4.1 探针的设计与筛选是基因芯片技术的关键  42-43
    4.4.2 基因芯片制备的质量控制是基因芯片技术的主要保证  43-44
    4.4.3 动物源性靶基因的标记  44-45
    4.4.4 基因芯片检测技术的特异性、灵敏度与重复性  45-46
第五章结论  46-47
致谢  47-48
参考文献  48-54
附录一动物源性基因芯片检测信号比较  54-62
个人简介  62-63
导师简介  63-65

应用基因芯片技术鉴别检测动物源性成分

内容摘要

全文目录

相似论文