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La蛋白及其突变对乙型肝炎病毒转录翻译启动和复制的影响

作　者: 孙静慧
导　师: 刘皋林；谭龙益
学　校: 第二军医大学
专　业: 药理学
关键词: La蛋白突变乙型肝炎病毒电泳迁移率变动分析体外转录翻译 RNA干扰病毒复
分类号: R91
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

本课题在体外转录翻译系统和稳定表达HBV的肝癌细胞中,研究La及其突变对HBVRNA的结合力、转录、翻译和病毒复制的影响。制备野生型La和突变体DeL1、DeL2、DeL3;构建adr HBV全基因、ORF-P、ORF-S、ORF-C和ORF-X真核表达质粒。应用电泳迁移率变动分析实验和体外转录翻译系统,研究La及其突变体对HBV RNA的迁移率、HBV及ORF转录和HBsAg、HBeAg表达的影响;在HepG2.2.15细胞内,采用SiRNA干扰细胞内La的表达,探讨La与HBV蛋白表达和复制的关系。结果发现:野生型La使HBV RNA迁移率显著降低且亲和力最强,不同位点的突变影响亲和结合力,RRM3缺失影响最显著;野生型La上调HBV全基因、P基因、C基因转录和HBsAg表达,抑制X基因转录和HBeAg表达,DeL2显著抑制X基因转录,DeL2和DeL3促进HBeAg表达;细胞内HBsAg、HBeAg和:HBV DNA含量与La的表达呈正相关。表明,RRM3与La的结合功能有关,RRM3和KRM2参与HBV转录和翻译启动的调控,La与HBV之间有密切相互作用关系,为寻找新的抗HBV药物靶点提供重要的实验依据。

全文目录

英文缩略词  6-8
中文摘要  8-14
英文摘要  14-20
前言  20-22
第一部分人 La蛋白及其突变体原核表达质粒的构建和诱导表达纯化  22-44
  第一节人La蛋白突变体表达质粒的构建  23-33
  第二节人La蛋白及其突变体质粒的表达和纯化  33-44
第二部分体外系统中La蛋白及其突变对HBV转录和蛋白表达的影响  44-80
  第一节 La蛋白及其突变体与HBV RNA茎环结构的结合性分析  45-54
  第二节 La蛋白及其突变对adr亚型HBV RNA体外转录的影响  54-73
  第三节 La蛋白及其突变对HBV蛋白表达的影响  73-80
第三部分 HepG2.2.15细胞内La蛋白对HBV蛋白表达和复制的影响  80-98
  第一节 La蛋白特异性SiRNA的合成与转染  80-86
  第二节细胞内La蛋白与HBV蛋白表达和病毒复制的关系  86-98
小结  98-100
参考文献  100-106
综述  106-121
发表论文及主要成绩  121-123
致谢  123

La蛋白及其突变对乙型肝炎病毒转录翻译启动和复制的影响

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