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使用SPR生物传感器快速检测大肠杆菌的研究

作　者: 葛晶
导　师: 殷涌光
学　校: 吉林大学
专　业: 农业机械化工程
关键词: SPR生物传感器胶体金复合抗体检测限检测大肠杆菌浓度
分类号: TP212.9
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

本课题是2002 年吉林省科技厅国际合作研究资助项目。SPR生物传感器具有实时检测、方便快捷、灵敏度高、不需对样品进行预处理等特点,作为一种快速的检测工具在各个领域得到了广泛应用。本文采用美国Texas Instruments 公司生产的集成化手持式SpreetaTMSPR传感器。通过一系列试验,研究了增强SPR 生物传感器金膜表面物质响应信号、提高SPR 生物传感器的检测限的一系列方法,包括引入亲和素—生物素系统、复合抗体夹心系统、胶体金复合抗体夹心系统等方法对SPR 生物传感器的检测限的影响。并采用以上三种方法对大肠杆菌E.Coli O157:H7 进行了检测。试验结果表明,采用胶体金复合抗体夹心系统,将SPR 传感器对大肠杆菌E.Coli O157:H7 的检测限从10~6cfu/ml 提高到了10~1cfu/ml,检测时间为33~40min。同时通过实验确定了胶体金中大肠杆菌E.Coli O157:H7 抗体量的最适值是8μg/ml;提出曲线斜率作为检测细菌浓度的方法,可将回归方程自变量的系数提高937.5 倍。

全文目录

第一章绪论  9-43
  1.1 选题的目的和意义  9-12
    1.1.1 问题的提出  9-11
    1.1.2 本文的目的  11-12
    1.1.3 本文的意义  12
  1.2 生物传感器的研究现状与发展  12-41
    1.2.1 生物传感器的类型  14-17
    1.2.2 SPR 生物传感器的基本原理  17-22
    1.2.3 生物活性单元的固定  22-27
    1.2.4 手持式SpreetaTMSPR 传感器  27-28
    1.2.5 SPR 传感器的应用  28-37
    1.2.6 SPR 传感器研究的新进展  37-41
  1.3 本文的研究内容  41-43
第二章生物素—亲合素系统的研究  43-53
  2.1 引言  43
  2.2 生物素与亲合素的生物学特性  43-46
    2.2.1 生物素(biotin,B)  43-44
    2.2.2 亲合素(avidin,A)  44
    2.2.3 生物素-亲合素系统(BAS)  44-46
  2.3 试验条件影响与分析  46-50
    2.3.1 手持式SpreetaTMSPR 传感器  46
    2.3.2 试验材料  46-47
    2.3.3 试验方法  47-50
  2.4 试验结果与讨论  50-51
  2.5 本章小结  51-53
第三章复合抗体夹心方法提高SPR检测限的研究  53-61
  3.1 引言  53-54
  3.2 试验条件影响与分析  54-57
    3.2.1 实验材料  54
    3.2.2 试验方法  54-56
    3.2.3 检测步骤  56-57
  3.3 试验结果与讨论  57-60
    3.3.1 生物素—亲合素系统的引入  57
    3.3.2 复合抗体的引入  57-60
  3.4 本章小结  60-61
第四章引入免疫胶体金提高SPR检测限的研究  61-77
  4.1 引言  61
  4.2 胶体金标记抗体的基本原理  61-64
    4.2.1 基本原理  61-62
    4.2.2 胶体金的制备方法  62-63
    4.2.3 制备高质量胶体金的注意事项  63-64
  4.3 试验条件影响与分析  64-70
    4.3.1 实验材料  64
    4.3.2 免疫胶体金的制备  64-66
    4.3.3 试验方法  66-68
    4.3.4 检测步骤  68-70
  4.4 试验结果与讨论  70-75
    4.4.1 大肠杆菌E.Coli0157:H7 的检测结果与分析  70-74
    4.4.2 斜率分析方法  74-75
  4.5 本章小结  75-77
第五章反应动力学分析  77-89
  5.1 引言  77-78
  5.2 动力学分析理论  78-81
    5.2.1 质量和动力学常数测定的理论依据  78
    5.2.2 介质质量的测定  78-79
    5.2.3 动力学分析  79-81
  5.3 SPR 传感器的灵敏度及其影响因素  81-83
  5.4 试验条件影响与分析  83-85
    5.4.1 实验材料  83
    5.4.2 试验方法  83-84
    5.4.3 检测步骤  84-85
  5.5 试验结果与讨论  85-88
  5.6 本章小结  88-89
第六章 SPR检测沙门氏菌的研究  89-103
  6.1 引言  89-91
  6.2 试验条件影响与分析  91-97
    6.2.1 实验材料  91-92
    6.2.2 免疫胶体金的制备  92-93
    6.2.3 试验方法  93-96
    6.2.4 沙门氏菌检测步骤  96-97
  6.3 试验结果与讨论  97-100
  6.4 斜率分析方法  100-101
  6.5 本章小结  101-103
第七章全文总结  103-106
参考文献  106-112
摘要  112-115
ABSTRACT  115-118
致谢  118

使用SPR生物传感器快速检测大肠杆菌的研究

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