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轮中党参抗突变功能因子及其作用机理研究

作　者: 韩春姬
导　师: 许文燮；李在琉
学　校: 延边大学
专　业: 生理学
关键词: 轮叶党参 抗突变 功能因子 自由基 微核 DNA链断裂 Ames试验
分类号: S567.53
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


轮叶党参是桔梗科党参属多年生缠绕草本,是药食两用的植物。由于其具有滋补强壮之功效,因此被视为是高级健康食品。本文采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、单细胞凝胶电泳试验探讨了轮叶党参乙醇提取物的抗突变作用,通过胞质分裂阻滞微核试验、小鼠体内超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量及体外清除自由基实验探讨轮叶党参乙醇提取物的抗突变作用的机制。结果表明轮叶党参乙醇提取物能明显拮抗环磷酰胺（CP）诱发小鼠骨髓细胞微核率增高作用、诱发大鼠血淋巴细胞DNA损伤作用及诱发小鼠精子畸形作用。轮叶党参乙醇提取物能显著提高用CP处理的小鼠肝脏SOD活性并降低MDA含量,明显清除体外形成的羟自由基,且呈剂量效应关系。在诱变剂处理前、处理后以及与诱变剂同时处理细胞,轮叶党参乙醇提取物均表现出很强的抗突变作用,但轮叶党参乙醇提取物浓度较低时,预处理细胞时的抗突变作用最佳。胞质分裂阻滞微核试验结果提示,轮叶党参乙醇提取物既可以作为生物抗突变剂在细胞内保护遗传物质免受损伤,又可以在细胞外作为去突变剂阻止诱变剂进入细胞内或在细胞外灭活毒性。 应用Ames试验对轮叶党参中的抗突变活性部位进行了筛选,证明乙酸乙酯和石油醚萃取部位的抗突变作用最强。应用硅胶柱层析等分离手段,从抗突变作用最强的有效部位中分离得到6个化合物,经理化常数测定和光谱(MS、El-MS、GC/MS、1H-NMR、13C-NMR)分析技术鉴定了6个化合物的结构式,分别为齐墩果酸、α.菠甾醇、蒲公英赛醇、二十七烷酸、十六烷酸已酯、9-十八炔。其中二十七烷酸和9-十八炔是首次在轮叶党参中的得到的成分。6个化合物中,选择得率较多的齐墩果酸、α-菠甾醇、蒲公英赛醇、二十七烷酸进行抗突变试验,结果表明前三者对直接致突变剂叠氮钠和间接致突变剂B（a）P具有较强的抗突变作用,三者中抗突变作用最强的物质为齐墩果酸,从而证明轮叶党参中的主要抗突变功能因子为齐墩果酸,但不是唯一的物质,轮叶党参的抗突变作用可能是多种物质协同作用的结果。 应用Ames试验、胞质分裂阻滞微核试验、DNA裂解试验探讨了从轮叶党参中提取的齐墩果酸抗突变作用的有效剂量范围及其对DNA损伤的预防作用及其机制。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-14
第一章 轮叶党参乙醇提取物的抗突变作用研究  14-37
  1．1 实验材料  14-16
    1．1．1 实验动物  14
    1．1．2 轮叶党参乙醇提取物的准备  14-15
    1．1．3 实验试剂  15
    1．1．4 仪器设备  15-16
  1．2 实验方法  16-21
    1．2．1 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验  16-17
    1．2．2 大鼠外周血双核淋巴细胞微核试验  17-19
    1．2．3 小鼠精子畸形试验  19
    1．2．4 单细胞凝胶电泳试验  19-21
    1．2．5 肝脏组织SOD活性和MDA含量测定  21
    1．2．6 体外清除自由基试验  21
    1．2．7 统计学处理  21
  1．3 实验结果  21-27
    1．3．1 对CP诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的抑制作用  21-22
    1．3．2 对CP诱发大鼠血淋巴细胞微核的抑制作用  22
    1．3．3 对CP诱发的小鼠精子畸形的影响  22
    1．3．4 对DNA损伤的保护作用  22-25
    1．3．5 对体内抗氧化酶活性和丙二醛水平的影响  25-27
    1．3．6 体外清除自由基的作用  27
  1．4 讨论  27-31
  1．5 结论  31-33
  参考文献  33-37
第二章 抗突变功能因子的分离及其结构测定  37-67
  2．1 仪器与试剂  38
  2．2 功能因子提取分离步骤  38-39
  2．3 化合物的结构鉴定  39-44
    2．3．1 油状成分的鉴定  39-41
    2．3．2 晶体的结构鉴定  41-44
  2．4 晶体的理化性质和波谱数据  44-46
    2．4．1 蒲公英赛醇  44-45
    2．4．2 α-菠甾醇  45
    2．4．3 二十七烷酸  45-46
    2．4．4 齐墩果酸  46
  2．5 讨论  46-47
  2．6 结论  47-48
  参考文献  48-67
第三章 抗突变功能因子的确定  67-83
  3．1 材料与方法  67-72
    3．1．1 仪器与试剂  67-68
    3．1．2 实验方法  68-72
  3．2 结果  72-78
    3．2．1 抗突变有效部位  72
    3．2．2 单体化合物的抗突变实验结果  72-75
    3．2．3 齐墩果酸对紫外线诱发DNA链断裂的保护作用  75
    3．2．4 齐墩果酸对大鼠DNA损伤修复实验结果  75
    3．2．5 齐墩果酸对MMC诱发双微核淋巴细胞微核率的影响  75-78
  3．3 讨论  78-80
  3．4 结论  80-81
  参考文献  81-83
第四章 轮叶党参中齐墩果酸的最佳提取工艺研究  83-88
  4．1 材料与方法  83-84
    4．1．1 主要仪器与设备  83
    4．1．2 药材与试剂  83
    4．1．3 实验方法  83-84
  4．2 结果  84-85
  4．3 讨论  85-86
  4．4 结论  86-87
  参考文献  87-88
创新点摘要  88-89
致谢  89-90
综述 植物性食物抗突变作用研究进展  90-112

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 喜阴药物 > 其他
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