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大别山野葛HPLC指纹图谱库的构建及其植物化学物对乙醇神经毒性保护作用的研究

作　者: 韩萍
导　师: 吴德生
学　校: 四川大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 葛根粗提物 葛根素 胎鼠海马细胞 氧化应激 质量控制 季节 部位年轮 提取工艺 野葛 葛根淀粉 指纹图谱 高效液相色谱 循环经济 乙醇 胚胎期小鼠 海马细胞培养 HSP70 SOD
分类号: R285
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 475次
引　用: 6次
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内容摘要


数千年以来,中药及其制剂在众多亚洲国家,如中国、朝鲜、日本等国,得到了广泛地应用。在过去的十几年里,中药又成为欧盟、美国等国家关注的焦点。然而,随着中医药疗法在世界范围内的广泛应用,中药的安全问题也日益受到人们的关注。其原因在于缺乏评价中药内在质量的标准,缺乏反映中药真实质量的评价方法。目前,中药指纹图谱分析已成为鉴别中药真实性和评价其质量一致性以及产品稳定性的切实可行的方法,也成为国际上公认的控制中药或天然药物质量的最有效的手段。 美国2001年死亡报告资料显示,引起死亡的慢性原因排位中前9位都与酒精有关,分别为酗酒、酒精性心肌病、酒瘾综合症、酒精性多发神经病、酒精性慢性胰腺炎等,急性原因中酒精中毒排名第2。 酒精滥用和酒精依赖已成为当今世界的一个严重的公共卫生问题。中药在酒精性相关疾病的预防和治疗中发挥着重要的作用,其中葛根用于解酒已有悠久的历史,如《千金要方》以鲜葛根捣汁给酒醉不醒者。对于葛根解酒功能的研究,目前主要是利用其一种或几种有效成分,如王

全文目录


中文摘要  10-21
英文摘要  21-38
一、前言  38-55
二、研究内容  55-170
  第一部分 大别山野葛HPLC指纹图谱库的构建  55-123
    引言  55-57
    第一章 大别山野葛HPLC指纹图谱方法学研究  57-71
      1.引言  57-58
      2.仪器与试剂  58-59
      3.方法  59-61
        3.1 色谱条件  59
        3.2 参照物溶液的制备  59
        3.3 供试品溶液的制备  59-60
        3.4 HPLC指纹图谱测定方法  60
        3.5 方法学考察  60-61
          3.5.1 线性关系考察  60
          3.5.2 精密度试验  60
          3.5.3 加样回收率  60-61
          3.5.4 重现性试验  61
          3.5.5 稳定性试验  61
          3.5.6 专属性试验  61
      4.结果  61-67
        4.1 共有峰的指定  62-65
        4.2 参照峰的指定  65
        4.3 共有峰的相对保留时间，相对峰面积，共有峰总面积百分比  65-67
      5.讨论  67-71
        5.1 有关方法学的考证  67
        5.2 建立指纹图谱的关键  67-68
        5.3 大别山系野葛HPLC指纹图谱间的比较  68-71
    第二章 大别山野葛HPLC指纹图谱库的构建  71-109
      1.引言  71
      2.仪器与试剂  71
      3.方法  71
      4.结果  71-102
        4.1 不同季节野葛药材HPLC指纹图谱的比较  71-80
        4.2 野葛药材不同部位HPLC指纹图谱的比较  80-87
        4.3 不同年轮野葛药材HPLC指纹图谱的比较  87-92
        4.4 不同朝向的野葛药材HPLC指纹图谱的比较  92-97
        4.5 多级提取时对野葛药材HPLC指纹图谱的影响  97-102
      5.讨论  102-109
        5.1 有关不同季节葛根素含量的讨论  102
        5.2 不同季节野葛HPLC指纹图谱的讨论  102-103
        5.3 野葛不同部位HPLC指纹图谱的讨论  103
        5.4 野葛不同年轮HPLC指纹图谱的讨论  103
        5.5 野葛不同朝向HPLC指纹图谱的讨论  103-104
        5.6 野葛提取中乙醇浓度的探讨  104-108
        5.7 多级提取时不同提取阶段对野葛药材HPLC指纹图谱的影响  108-109
    第三章 利用指纹图谱技术探讨传统加工工艺中葛根资源利用度的研究  109-123
      1.引言  109
      2.葛根淀粉传统加工工艺的基本工艺过程  109-117
      3.HPLC指纹图谱测定方法  117
      4.HPLC指纹图谱测定结果  117-119
      5.讨论  119-123
        5.1 葛根淀粉传统加工工艺对葛根资源的利用的不合理性  119
        5.2 以科学的发展观，遵循循环经济的原则，合理利用自然资源  119-123
  第二部分 野葛粗提物及其主要成分葛根素改善乙醇神经毒性作用的研究  123-170
    引言  123-130
    第一章 乙醇对胚胎期小鼠海马细胞毒性作用的研究  130-154
      1.引言  130
      2.材料与方法  130-141
        2.1 材料  130-133
          2.1.1 动物  130-131
          2.1.2 主要试剂  131-132
          2.1.3 主要仪器及器皿  132-133
        2.2 方法  133-141
          2.2.1 细胞培养主要用液  133-134
            2.2.1.1 MEM基础培养液的配置  133
            2.2.1.2 完全培养液的配置  133
            2.2.1.3 1×PBS  133
            2.2.1.4 0.25％胰蛋白酶  133-134
          2.2.2 胎鼠海马细胞的分离及培养  134
          2.2.3 细胞毒性实验  134-135
          2.2.4 乙醇对hsp70和SOD mRNA表达影响  135-137
            2.2.4.1 处理因素的实施  135
            2.2.4.2 细胞总mRNA的提取  135-136
            2.2.4.3 逆转录合成cDNA  136
            2.2.4.4 PCR扩增  136-137
            2.2.4.5 RT-PCR结果分析  137
          2.2.5 乙醇对hsp70和SOD蛋白表达影响  137-141
            2.2.5.1 主要溶液  137-139
            2.2.5.2 检测样本的制备  139
            2.2.5.3 制胶  139-140
            2.2.5.4 电泳  140
            2.2.5.5 转膜  140-141
            2.2.5.6 封闭  141
            2.2.5.7 靶蛋白与第一抗体反应  141
            2.2.5.8 第二抗体反应  141
            2.2.5.9 结果显示  141
          2.2.6 统计学处理  141
      3.结果  141-146
        3.1 乙醇对海马细胞活力的影响  141-142
        3.2 细胞总mRNA提取效果检测  142-143
        3.3 乙醇对海马细胞hsp70及SOD mRNA表达的影响  143-145
        3.4 乙醇对海马细胞hsp70及SOD蛋白表达的影响  145-146
      4.讨论  146-154
        4.1 乙醇导致神经毒性模型的建立  146-147
        4.2 HSP对乙醇致神经毒性的保护作用  147-150
        4.3 SOD对乙醇致神经毒性的保护作用  150-154
    第二章 野葛粗提物及其主要成分葛根素对乙醇引起海马细胞毒性保护作用的研究  154-170
      1.引言  154
      2.材料与方法  154-161
        2.1 材料  154-157
          2.1.1 动物  154-155
          2.1.2 主要试剂  155-156
          2.1.3 主要仪器及器皿  156-157
        2.2 方法  157-158
          2.2.1 制备葛根粗提物  157
          2.2.2 细胞培养主要用液  157-158
            2.2.2.1 MEM基础培养液的配置  157-158
            2.2.2.2 完全培养液的配置  158
            2.2.2.3 1×PBS  158
            2.2.2.4 0.25％胰蛋白酶  158
        2.3 实验分组  158-159
        2.4 胎鼠海马细胞的分离及培养  159
        2.5 CP和SP对海马细胞ICO浓度的建立  159
        2.6 CP和SP对乙醇引起的海马细胞毒性的拮抗作用  159-160
        2.7 CP和SP对乙醇引起的Hsp70和SOD mRNA表达变化的影响  160
        2.8 CP和SP对乙醇引起的Hsp70和SOD蛋白表达变化的影响  160-161
          2.8.1 细胞总蛋白的提取  160
          2.8.2 Western Blot操作步骤  160-161
        2.9 统计学处理  161
      3 结果  161-165
        3.1 CP和SP对海马细胞活力的影响  161-162
        3.2 CP和SP均可拮抗乙醇引起的海马细胞毒性作用  162-163
        3.3 CP和SP均可抑制乙醇引起的Hsp70和SOD表达量升高  163-165
      4.讨论  165-170
        4.1 CP和SP对乙醇抑制海马细胞增殖活力的影响  165-166
        4.2 CP和SP对乙醇所致海马细胞HSP70表达的影响  166-167
        4.3 CP和SP对乙醇所致海马细胞SOD表达的影响  167-168
        4.4 创建中药“谱效”研究  168-170
三、参考文献  170-202
四、酒精性肝病发病机制的研究进展(综述)  202-234
五、致谢  234-236
六、声明  236

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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