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甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变分子诊断标志物的研究

作　者: 陈云
导　师: 朱明华；周晓军
学　校: 第二军医大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 甲状腺肿瘤瘤样病变滤泡细胞诊断良恶性预后 Ret Mucin-1 Galectin-3 甲状腺转录因子-1 钠碘转运体甲状腺过氧化物酶免疫组织化学免疫电镜逆转录聚合酶链反应技术核酸原位杂交
分类号: R736.1
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

目的探讨甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变中Ret、Mucin-1(MUC1)、Galectin-3(Gal-3)和TTF-1基因蛋白产物，甲状腺过氧化物酶(TPO)mRNA和钠碘转运体(MS)mRNA的表达，寻找有助于良恶性甲状腺滤泡细胞源性肿瘤诊断的分子标志物，充实现有的诊断病理学内容；判断临床病理指标中对诊断标志物识别的一些相关因素以及影响甲状腺肿块复发的可能因素。方法 ①采用免疫组织化学(SP)法，对212例甲状腺手术切除标本进行了Ret、MUC1和Gal-3基因蛋白产物的检测；对其中132例标本进行了TTF-1蛋白的检测；18例甲状腺手术快速诊断标本进行了Lowicryl K4M的低温包埋，在此基础上对上述四种标志物及甲状腺球蛋白进行了免疫细胞化学的电镜定位观察；标本同时进行了常规电镜及冷冻割裂的扫描电镜制样，从组织病理及超微病理水平观察甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变的形态表现及与Ret、MUC1、Gal-3和TTF-1基因蛋白产物的关系。②应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，对55例甲状腺手术新鲜标本的NIS mRNA和TPO mRNA丰度进行了定性检查。用光密度扫描仪测定并计算样品的TPO／β-actin比值，代表TPO mRNA丰度的相对含量。③应用核酸原位杂交技术，定位观察10例病人TPO mRNA的表达情况。在RT-PCR法扩增TPO cDNA的基础上，目的片段T-A克隆(pMD18-T载体)，构建了pSPT19-TPO质粒，分别进行HindⅢ和BamH Ⅰ单酶切，使之成线性化模板，在SP6和T7 RNA聚合酶作用下，体外转录合成地高辛标记的TPOcRNA反义和正义探针，进行TPO mRNA的核酸原位杂交实验。④观察Ret、MUC1和Gal-3表达与甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变的临床及病理学形态指标的相互关系(单因素及多因素分析)，并与随访病人和住院病史资料相结合，分析甲状腺肿瘤有关的生物学行为。⑤上述工作的统计学处理：采用Stata7.0软件包。1)多组指标阳性率的比较，采用费歇尔精确检验，两两比较对α水准用Bonferroni法进行了校正；指标之间的相互关系采用Spearman等级相关分析；对TPO定量结果的分析，采用单因素方差分析，两两比较用Scheffe法。2)Ret、第二军医大学博士学位论文中文摘要MUCI、Gal一3等指标的表达与临床病理学指标的关系及良恶性病变组临床病理特征的比较:在单因素fogistic回归分析的基础上，用多因素逐步logistic回归模型筛选变量(逐步向后法)。3)临床随访资料的生存分析:在单因素分析的基础上(Log-rar止检验)，用Cox比例风险模型结合逐步回归的思想筛选变量(逐步向后法)。结果第一部分:212例手术切除标本不同病理类型病变的Ret、MUCI和Gai一3三种基因表达产物的免疫组化染色结果如下:良性病变(结节性甲状腺肿，简称结甲和腺瘤)与恶性病变(乳头状癌和滤泡性癌)三种基因产物的表达，差异有统计学意义(尸二0.000)，恶性病变阳性表达率高于良性病变。Ret阳性产物为胞质型，乳头状癌大多呈强阳性反应。结甲与乳头状癌、腺瘤与乳头状癌、滤泡性癌与乳头状癌Ret阳性率的比较，差异均有统计学意义(尸一0.000)。MUCI阳性产物为胞质型，部分为胞质胞膜型。腺瘤和结甲与乳头状癌分别比较，其阳性率的差异二者均有统计学意义(尸=0 .000，尸=0.0%);腺瘤与滤泡性癌之间的比较，差异亦有统计学意义(P=o.o00):而腺瘤与结甲、乳头状癌与滤泡性癌、结甲与滤泡性癌比较，差异无统计学意义(P=。.083，尸=0 .829，尸=。.051)。Gal一3阳性产物主要为胞质型，但恶性肿瘤细胞核染色阳性常见。两种良性病变与甲状腺癌的差异有统计学意义(尸二0.000):乳头状癌与滤泡性癌Gal一3阳性率的比较，差异有统计学意义(P=0.o02);而结甲与腺瘤比较，差异没有统计学意义 (尸=0.272)。部分胎儿型和单纯型腺瘤中见灶性MUCI和Gal一3同时阳性。其它型腺瘤(除非典型腺瘤以外的腺瘤)、非典型腺瘤和滤泡性癌三者三种蛋白阳性率的差异均有统计学意义，三者三个指标阳性率的表达呈递增趋势;Gal一3阳性表达率:其它型腺瘤与滤泡性癌两者间的差异有统计学意义(P=O.OOO)，而非典型腺瘤与滤泡性癌两者间的差异没有统计学意义护=0 .246)。13例乳头状微癌中，Gal一3全部阳性，RetlZ例阳性，MIJC 15例阳性。三种蛋白的免疫电镜定位结果与光镜免疫组化结果相吻合。第二部分:①132例甲状腺病理标本的T吓一1检测:结甲、腺瘤、乳头状癌和滤泡性癌四种不同病理类型的周围正常组织TTF一1胞核阳性反应无统计学意义(P>o.05):良、恶性病变TTF一1的胞核反应差异无统计学意义(尸> 0.05);TTF。1胞质阳性反应在良、恶性病变差异有统计学意义(尸<0.05)，甲状腺癌阳第二军医大学博士学位论文中文摘要性率(66.1。%)高于结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤(27.40%)。免疫电镜观察:良性滤泡细胞的细胞核中见金颗粒的积聚，而乳头状癌滤泡细胞的胞质中，粗面内质网的核糖体、粗面内质网腔内及运输小泡中见金标颗粒。甲状腺癌TTF一l胞质反应与MUCI和Gal一3阳性表达有关(尸<0.05)。②甲状腺手术新鲜标本MS mRNA和开0 mRNA表达的检测:55例甲状腺组织中，良性病变NIS mRNA阳性率55.56%，恶性肿瘤NIS mRNA阳性率73.68%，二者的差异无统计学意义 (

全文目录

中文摘要  5-10
英文摘要  10-15
缩写词表  15-17
前言  17-20
第一部分甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变中Ret、Mucin-1和Galectin-3基因蛋白产物表达的研究  20-58
  材料和方法  20-28
  结果  28-37
  讨论  37-44
  参考文献  44-48
  附图  48-58
第二部分甲状腺激素合成相关基因在甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变的表达及意义  58-107
  一、 TTF-1在甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变的表达  58-61
    材料和方法  58-59
    结果  59-61
  二、 NIS mRNA在不同病理状态甲状腺组织的表达  61-70
    材料和方法  61-66
    结果  66-70
  三、 TPO mRNA在不同病理状态甲状腺组织的表达  70-89
    材料和方法  70-82
    结果  82-89
  四、 TTF-1、NIS mRNA和TPO mRNA与Ret、Mucin-1和Galectin-3基因表达产物的相关性分析  89-93
    材料和方法  89-90
    结果  90-93
  五、讨论  93-100
  六、参考文献  100-104
  七、附图  104-107
第三部分 Ret、Mucin-1和Galectin-3蛋白表达与甲状腺滤泡细胞性肿瘤及瘤样病变的临床病理学相关性分析及预后的关系  107-127
  材料和方法  107-110
  结果  110-121
  讨论  121-125
  参考文献  125-127
全文总结:  127-129
附录一: 研究生期间发表相关论文情况  129-130
附录二: 综述1:甲状腺特异性转录因子和靶基因与甲状腺肿瘤  130-138
附录三: 综述2:甲状腺结节细针穿刺活检的细胞病理诊断学  138-146
附录四: 致谢  146

甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变分子诊断标志物的研究

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