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加味丹参饮预处理对缺血心肌延迟保护作用及细胞信号转导调节研究

作　者: 黄政德
导　师: 陈大舜
学　校: 湖南中医学院
专　业: 中医内科学
关键词: 加味丹参饮药物预处理缺血预处理缺血再灌注缺氧再灌注细胞信号转导腺苷肌酸激酶乳酸脱氢酶蛋白激酶C 降钙素基因相关肽一氧化氮合成酶一氧化氮内皮素热休克蛋白核因子－κB 基因表达
分类号: R259.4
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

目的：探讨加味丹参饮对心肌的缺血预处理样作用及预处理样作用的细胞信号转导机制。方法：分别建立家兔心肌缺血再灌注损伤模型和乳鼠心肌细胞缺氧再给氧模型，以缺血（缺氧）预处理为对照，观察加味丹参饮预适应用药及腺苷受体阻滞剂8－苯基茶碱阻断24h后，缺血（缺氧）再灌注（再给氧）对心肌（细胞）的损伤作用及对细胞信号转导物质的影响。判断加味丹参饮心肌延迟保护作用的指标分别为：心肌梗死面积、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、心肌细胞形态学改变及细胞超微结构变化、左心室内压变化、标准Ⅱ导联心电图ST段改变和心律失常等。判断细胞信号转导机制的指标有：血清腺苷（AD）、降钙素基因相关肽（CGRP）、总一氧化氮合酶（NOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、一氧化氮（NO）、蛋白激酶C（PKC）、热休克蛋白70（HSP70）基因表达及核因子－κB（NF-κB）基因表达等。结果： 1.缺血再灌注(I/R)组家兔部分心肌纤维断裂，有灶性出血，心肌间质大量炎性细胞浸润;加味丹参饮预处理后部分心肌纤维呈波浪状，肌浆分布不匀，心肌间质无出血，有数量不等炎性细胞浸润，但心肌结构基本正常，仅少数线粒体有轻度水肿；缺氧再给氧组多数心肌细胞脱落、死亡，镜下所见贴壁生长细胞较少，加味丹参饮预处理后，贴壁细胞有所数量减少，但形态基本正常，腺苷受体阻滞剂影响不明显。2. 加味丹参饮预处理和缺血预处理能显著缩小缺血再灌注损伤家兔心肌梗死危险区面积和心肌缺血梗死，其中药物预处理对缩少心肌梗死危险区面积作用明显优于缺血预处理组。3.药物预处理组（DPC）和缺血预处理组（IPC）对缺血再灌注所致的左心室收缩压（LVSP）和舒张压（LVDP）下降有较好的对抗作用，其中DPC对LVDP作用尤为明显。两者对左室内压最大上升速率（+dp/dt max和）和最大下降速率（-dp/dt max）变化无明显的影响。<WP=4>4.I/R组家兔标准Ⅱ导联心电图心率明显减慢、ST段明显抬高或T波倒置、绝大部分出现心律失常（87.5％）；而药物预处理和缺血预处理对ST段抬高或T波倒置以及心律失常有明显的改善作用（P<0.05），对心率变化作用不明显（P＞0.05）。5.缺氧再给氧组心肌细胞培养液中LDH、CK活性升高，与血清对照组和药物血清对照组比较，差异有显著性意义（P<0.01）；药物预处理和缺血预处理能显著抑制LDH和CK活性升高（P<0.01）；腺苷抑制剂8-苯基茶碱能明显对抗IPC的作用，而对DPC的对抗作用不明显。6.I/R组家兔血清腺苷含量显著下降（P<0.01），缺血预处理和药物预处理对内源性腺苷的产生有明显的促进作用，其中，缺血预处理作用尤为明显。7.I/R组家兔血清总NOS活性和结构性NOS（cNOS）活性在缺血再灌注后下降，统计学处理差异有显著性意义（P<0.05、P<0.01），而诱生型NOS（iNOS）活性在各时相变化不明显（（P>0.05）；DPC组在预处理后24h总NOS活性及cNOS活性明显升高并持续至缺血再灌注后（P<0.05），iNOS活性略有升高，但统计学处理无显著性意义（P>0.05）；IPC组家兔血清总NOS活性及iNOS、cNOS活性在缺血预处理后均升高，统计学处理有显著性意义（P<0.05、P<0.01）。8.I/R组血清降钙素基因相关肽（CGRP）水平显著下降,与缺血前比较差异有非常显著性意义（P<0.01）。DPC组和IPC组家兔经预处理后24h，血清CGRP水平明显升高，与预处理前比较差异有显著性（P<0.01）；两组经缺血再灌注后，CGRP水平均有所下降，其中，IPC组下降明显（P<0.05）。9.和血清对照组比较，药物血清对照组NO、ET含量有所下降，但统计学处理差异无显著性（P>0.05），H/R组NO含量显著下降（P<0.01），而ET含量有所增加，但差异无显著性（P>0.05）；HPC和DPC对缺氧再给氧所致的NO降低和ET增加有较好的拮抗作用，但两组间差异无显著性（P>0.05）；8-苯基茶碱对两预处理组NO含量的变化有一定的对抗作用，其中对缺氧预处理作用尤为明显（P<0.05）；与I/R组比较，DPC组及加8-苯基茶碱组ET含量明显下降（P<0.05）。<WP=5>10. 与血清对照组比较H/R组PKC活性有所下降，但差异无显著性（P>0.05）；HPC组及DPC组PKC活性显著升高，与血清对照组和H/R组比较，差异有非常显著型意义（P<0.01）；用腺苷受体抑制剂8－苯基茶碱后HPC组能显著抑制PKC活性升高（P<0.01），而不能阻断DPC作用。11.用RT-PCR和凝胶电泳检测培养乳鼠心肌细胞HSP70 mRNA和NF-κB mRNA表达，结果显示，加味丹参饮预处理组HSP70 mRNA和NF-κBmRNA均明显表达，而其余6组均未检出HSP70 mRNA和NF-κBmRNA表达。提示HSP70 mRNA和NF-κBmRNA表达参与了加味丹参饮预处理对心肌细胞缺氧再给氧损伤的延迟保护作用。结论：加味丹参饮对家兔缺血再灌注损伤和乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤较好的延迟保护作用，能显著减少心肌梗死危险区面积和梗死区面积，维持心肌细胞正常形态结构、防止心肌细胞心肌酶外漏，提高左心室功能；其作用机制可能与促进内源性保护物质（腺苷、一氧化氮合酶、降钙素基因相关肽等）释放、细胞信号转导有密切的关系。

全文目录

中文摘要  3-6
英文摘要  6-9
前言  9-11
第一部分加味丹参饮预处理对家兔心肌缺血再灌注损伤的延迟保护作用  11-23
  材料与方法  23-29
  结果与分析  29-23
第二部分加味丹参饮对乳鼠心肌细胞缺氧损伤的延迟保护作用及细胞信号转导机制  23-45
  材料与方法  23-29
  结果与分析  29-33
  讨论  33-44
    一、冠心病的研究进展及加味丹参饮的组方依据  33-39
    二、加味丹参饮预处理的心肌延迟保护作用  39-40
    三、加味丹参饮预处理延迟保护作用的细胞信号转导机制  40-44
  小结  44-45
参考文献  45-53
附图  53-70
致谢  70

加味丹参饮预处理对缺血心肌延迟保护作用及细胞信号转导调节研究

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