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K-ras基因导入的鼠肺恶性转化细胞粘附能力的改变及临床意义

作　者: 张其刚
导　师: 胡永校
学　校: 中国医科大学
专　业: 外科学
关键词: 细胞粘附能力恶性转化细胞临床意义细胞间粘附肿瘤细胞浸润间隙连接细胞间信号传导浸润和转移肿瘤细胞播散紧密连接
分类号: R730.2
类　型: 博士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

众所周知，在世界范围内，人类恶性肿瘤的发病率呈逐年上升趋势。虽然治疗手段不断改善，但治疗效果提高的并不明显，其主要原因在于未能从根本上控制和阻断肿瘤细胞的浸润和转移。做为肿瘤研究领域的热点问题，肿瘤的浸润和转移特性受到许多研究者多年的关注，但仍未能从根本上解决这一难题。肿瘤细胞的浸润和转移是一个复杂的、多步骤的连续过程。可简要概述为：原发肿瘤→肿瘤细胞间、肿瘤细胞与基质间的相互连接能力下降或完全消失→肿瘤细胞相互分离，部分脱离原发灶→进入血管或淋巴管→转移病灶形成。在这个过程中，细胞间信号传导、粘附能力及细胞移动能力的改变起着决定性作用。因而，对于细胞间粘附结构、粘附分子及与细胞移动有关的分子进行深入的研究将有助于探讨肿瘤细胞的浸润和转移机制。现已知，构成细胞与细胞间、细胞与基质间粘附结构的粘附分子分为四大类，即钙粘素族(cadherins)、整合素族(integrins)、免疫球蛋白超族(immunoglobulin superfamily)及选择素族(selectins)。由粘附分子构成的细胞间粘附结构分为紧密连接(tight juntion)、粘附连接(adherin junction)和间隙连接(gapjunction)。其中由钙粘素分子与α-链蛋白(α-catenin)、β-链蛋白(β-catenin)和肌动蛋白丝(actin filament)共同形成的粘附连接在细胞与细胞间粘附中起着决定性作用。另外，α-链蛋白和β-链蛋白同时也是调节细胞间信号传导的重要分子。肌动蛋白则是维持细胞形态和与细胞移动能力有关的重要分子。间隙连接虽然其组成和结构不十分清楚，但在细胞间增殖、分化信号传导中的重要作用已被许多实验证实。对于上述粘附结构和粘附分子在肿瘤细胞浸润和转移过程中的作用，国内外学者都曾作过相应的研究，但以往的研究多集中在组织学和组织病理学水平，用肿瘤组织块做为标本，这种方法易受许多因素的影响，有一定局限性。如组织的来源不同，组织内细胞成份不同，峨士学位论文K式涟基三导“‘约鼠肺恶性并越气细绝钻呀能力的改变及临交意又形成肿瘤的致癌基因不单一或不明确等等，且各家的研究结果尚未达成统一的结论。因此，尚有许多研究工作需要进行。近年来，随着克隆技术、基因工程等分子生物学技术的发展，使得人类能够以分子生物学手段，从细胞和分子水平来研究某些疾病的生物学特性。这种手段大大减少了影响因素，并使得研究更深入、更直接、针对性更强。本研究利用RNA肿瘤病毒一一K一ras病毒做为载体，将其K一ras基因导入到正常鼠肺纤维细胞(Normal rat fung cells.NRL细胞)上，使其形成恶性转化细胞(K一ras transformed rat lung eells.KNR工细胞)以其做为研究对象，并用NRL细胞做为对照，考察当单一的、正常的细胞由于导入癌基因而形成恶性转化细胞后，其粘附结构及粘附分子的改变。本研究的特点在于:①有明确的细胞来源;②有明确的发生致癌作用的癌基因;③正常细胞和恶性转化细胞在相同的体外条件下培养，排除了其它因素的干扰。此外，K一ras基因是较常见的原癌基因，在许多恶性肿瘤中有其表达。恶性转化细胞是肿瘤细胞的早期阶段，考察其某些生物学行为的改变，对于探讨某一确定的癌基因导致的肿瘤细胞浸润和转移机制具有重要意义。目的:1.探讨细胞间粘附结构，细胞粘附分子及肌动蛋白分子在肿瘤细胞浸润、转移中的作用。2.钙离子、温度对细胞聚集能力的影响，探讨在外科手术治疗中，如何尽量减少手术操作过程中人为造成的肿瘤细胞播散转移。方法:利用KNRL细胞做为研究对象，与NRL细胞进行对照，然后进行相关的统计、分析。首先，利用细胞培养技术对两种细胞进行培养，然后测定两种细胞的倍增时间、软琼脂培养基内细胞增殖能力、KNRL细胞裸鼠腹腔内注射，观察生长方式及病理检查，以证实KNRL细胞具有肿瘤细胞的生物学特性。然后分别利用电镜技术检查细胞间的粘附结构，细胞内肌动蛋白的分布;利用免疫荧光标记和聚丙酸胺凝胶电泳(SDS一PAGE)及Westen印迹，检测细胞粘附分子的表达和细胞内肌动蛋白的表达和分布。最后结合临床手术实践检测博士学泣论文K一ras基里导入的鼠肺恶性转化细绝钻呀能分的岌交及临文意义钙离子、温度对细胞聚集能力的影响。结果:KNRL细胞恶性程度检测提示，KNRL细胞的倍增时间比NRL细胞明显缩短(P<0.05)，在软琼脂培养基内增殖能力明显高于NRL细抱(p<0.05)，注入裸鼠腹腔内的KNRL细胞在腹腔内呈浸润性生长并发生淋见结转移，因而证实KNRL细胞己具备肿瘤细胞的生物学特性。培养细胞光学显微镜下显示，NRL细胞呈单层生长，平行排列，极性一致。细胞大小，形态均一。细胞间紧密连接。而KNRL细胞，部分区域细胞呈复层生长，排列紊乱，失去极性，细胞形态变为圆形或不规则型。细胞间呈松散连接，细胞间隙明显增宽。电镜下显示，NRL细胞间三种主要粘附结构一紧密连接、粘附连接和间隙连接正常存在，细胞内肌动蛋白呈均匀、平行、丝状排列。而KNRL细胞间紧密连接和间隙连接完全消失，仅存少量、点状、类似粘附?

全文目录

中文摘要  3-7
英文摘要  7-12
英文缩略语  12-13
前言  13-15
实验材料与方法  15-20
实验结果  20-25
讨论  25-30
小结  30-31
结论  31-32
参考文献  32-34
论文图片  34-44
致谢  44-45
论文修改附页  45-47
文献综述  47-52
个人简历  52-53
在学期间发表论文及获奖情况  53

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