学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

MDC基因修饰的膜表达HSP70的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应及其机理探讨

作　者: 陈晓虹
导　师: 曹雪涛；余海
学　校: 浙江大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 热休克蛋白70 瘤苗巨噬细胞来源的趋化因子膜表达树突状细胞抗瘤免疫
分类号: R730.3
类　型: 博士论文
年　份: 2002年
下　载: 88次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类在生物进化过程中高度保守的应激蛋白，广泛存在于真核和原核生物体内。正常条件下，HSP占细胞内蛋白组分的5％，在细胞内作为分子伴侣(chaperone)参与蛋白质的折叠、装配、转运和降解。当细胞处于氧化损伤、糖缺乏、病毒感染、缺血再灌注、代谢抑制剂、重金属、乙醇等压力环境时会发生热休克反应，HSP合成增加，表达量可高达15％以上。根据分子量的不同可将HSP分为十个家族，HSP70家族是最保守的热休克蛋白家族之一，在应激条件下合成增加，维持细胞的生命活动。HSP70是一个位于胞浆的伴侣分子，参与胞浆内蛋白肽的折叠、转运，阻止蛋白聚集，恢复变性蛋白的功能。在早期的抗肿瘤免疫研究中，为了寻找与免疫相关的肿瘤特异性抗原，开展了一系列的研究工作。结果在肿瘤细胞的匀浆物中分离到具有免疫保护作用的蛋白组分，经鉴定，具有免疫原性的蛋白质大部分属于HSP70家族或HSP90家族。分离肿瘤组织的gp96、HSP70和HSP90分别用于免疫动物，结果确实诱导出肿瘤特异的CTL反应。进一步研究表明，HSP的免疫特异性取决于HSP伴随的小分子量蛋白肽，与HSP的多态性无关。在肿瘤的形成过程中，由于异常的细胞分裂以及基因组的不稳定可以导致随机突变的频繁发生，因此累积了一系列肿瘤特异的小分子蛋白肽，HSP在参与细胞内正常蛋白质转运过程时也与这些异常的蛋白肽结合，因此HSP诱导的免疫保护作用具有个体特异性。HSP本身起免疫佐剂的作用。来自于肿瘤组织的HSP－肽复合物可以诱导肿瘤特异的CTL反应，对随后的肿瘤细胞接种具有免疫保护作用，甚至只需要纳克水平的抗原肽与HSP在体外重构HSP肽复合物，就能充分激活机体特异性抗瘤免疫应答。抗原提呈细胞u而gen presenting CCll，APC）表面HSP受体的存在对这种高效的免疫激活作用作出了合理的解释。结合了细胞内抗原肽谱的HSP肽复合物通过与APC上的 HSP受体结合而内化，抗原肽经 KfllCI类途径呈递在 APC表面，诱导特异的抗瘤免疫应答。树突状细胞（Dendrih cell，DC）是目前已知道功能最强的APC，研究表明HSP肽复合物可以诱导DC成熟，使DC分泌炎性细胞因子和趋化因子，促进DC表达MHC分子和共刺激分子，成熟DC可以显著激活T细胞增殖，启动免疫应答。己知肿瘤形成的一个重要原因是由于肿瘤细胞免疫原性低下，逃逸了机体的兔疫监视。目前已证明T细胞介导的抗肿瘤免疫反应在抗肿瘤中起重要作用。T细胞激活需要识别双信号：信号！是抗原肽．MHC分子复合物，信号2是共刺激分子。很多肿瘤由于不能正常呈递抗原分子或者细胞表面免疫相关分于水平的下调，因而肿瘤的兔疫原性降低。对肿瘤细胞进行基因修饰，如转染细胞因子、共刺激分子或突变的CTL表位等，肿瘤细胞的免疫原性大大增强，可以有效地诱导抗肿瘤免疫应答。但是突变的CTL表位在不同肿瘤细胞上的表达不同，并不具有通用性，而且对其鉴定也是一项艰巨的任务。HSP具有结合肿瘤细胞内一系列突变的CTL表位的特性，作为疫苗使用时，体现了其优越性的一面。如果以细胞膜表面表达的方式表达HSP70，无疑可以将这些CTL表位从肿瘤细胞内携带出来，与HSP70共同表达于肿瘤细胞表面，从而增强肿瘤细胞的免疫原性。为了证实这种想法，我们构建了膜表 4达型HSP70载体，转染肿瘤细胞后筛选稳定高表达株，研究其作为肿瘤瘤苗免疫小鼠后诱导特异性抗瘤免疫反应的效果。实验结果提示肿瘤细胞膜表达HSP70可以有效地增强肿瘤细胞的免疫原性。已知HSP发挥免疫作用的关键是由于APC表面存在HSP受体，由受体所介导的抗原肽内吞导致了有效的兔疫激活作用。如果膜表达HSP70的肿瘤蚜胞处于一个富含APC的微环境中，HSP70通过与APC上的受体相互作用，其免疫激活作用无疑可以得到进一步增强。因此我们采用巨噬细胞来源的趋化因于（Macrophage derivedchemoldne，MDC）基因修饰膜表达 HSP70的肿瘤细胞，结合 MDC有效地趋化巨噬细胞、DC的特性以及HSP70与DC相互作用的特点，研究其作为瘤苗使用后对特异性抗肿瘤兔疫应答的诱导作用和相应的机理。结果表明，MDC基因修饰的膜表达HSP70的肿瘤瘤苗的免疫原性显著增强，能有效地诱导肿瘤特异的CTL反应。膜表达型HSP70发挥兔疫作用的机理与HSP70可以有效地诱导DC成熟并促进其抗原提呈功能密切相关。本研究分两部分：第一部分：膜表面表达B8P70的肿瘤瘤苗诱导抗瘤免疫反应的研究在正常倩况下，HPS70的表达位于胞浆。为了使HSP70以细胞膜表面的方式进行表达，需要在HSP70基因的启始密码子前添加信号肽序列，在HSP70基因的尾端融合跨膜序列。HSP70全长。DNA由美国西北大学 Sue Fox博士馈赠，通过特异的PCR引物扩增到1926hp的目的条带。信号肽序列和跨膜序列分别采用小鼠。链信号肽序列和血小板来源的生长因子受体（PDGFR）跨膜序列，均来自于 pDISplay载体（Invitrogen，CA）。上述片段酶切连接后构建到真核表达载?

全文目录

英文缩略词  3-4
中文摘要  4-12
英文摘要  12-24
论文正文  24-94
  第一部分  24-48
    前言  24-27
    材料和方法  27-32
    结果  32-41
    讨论  41-44
    参考文献  44-48
  第二部分  48-94
    前言  48-53
    材料和方法  53-63
    结果  63-82
    讨论  82-88
    参考文献  88-94
文献综述一  94-107
文献综述二  107-119
致谢  119

MDC基因修饰的膜表达HSP70的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应及其机理探讨

内容摘要

全文目录

相似论文