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海地瓜（Acaudina molpadioides）活性脂质的制备研究及抗肿瘤活性初探

作　者: 冯婷玉
导　师: 薛长湖；杨贤庆
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水产品加工及贮藏工程
关键词: 海地瓜脑苷脂神经酰胺甾醇长链碱高速逆流色谱
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 42次
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内容摘要

海地瓜(Acaudina molpadioides)属海参纲(Holothuroidea)芋参目(Molpadida)尻参科(Caudinidae),盛产于亚热带沙质海区,我国山东到海南岛的海域均有分布,是一种资源丰富的低值海参。鞘脂类和甾醇是海参中重要的活性脂质成分,具有多种生物活性功能,如抑制肿瘤、调节免疫活性、抗病毒、抗菌以及抗炎等多种生理功能。目前有关海参活性脂质的研究主要集中在刺参科的高值海参品种,国内外在海地瓜等低值海参活性脂质方面的研究较少。本论文以海地瓜为原料,对海地瓜的低极性活性脂质进行了分离纯化和结构鉴定,并以海地瓜脂质粗提物为原料水解制备了海地瓜长链碱化合物,在此基础上初步探讨了海地瓜低极性活性脂质和长链碱的抗S-180细胞活性,为开发低值海参新的食(药)用功效提供了理论基础和科学依据。主要研究内容和结果如下:1.采用有机溶剂提取、多步萃取和反复的正反相硅胶柱层析,对海地瓜的低极性脂质进行了分离纯化,并鉴定了纯化出的5种化合物的结构,分别为:1种神经酰胺类,3种脑苷脂类和1种甾醇类化合物。其中甾醇类:3β-O-硫酸酯-麦角甾-7,9(11),24(28)-三烯-硫酸钠盐为新化合物。以上化合物均为首次从该品种中分离得到。2.以海地瓜脂质粗提物为原料水解制备了海地瓜长链碱,并应用高速逆流色谱(HSCCC)技术成功优化了海地瓜长链碱化合物的纯化过程。海地瓜长链碱的HSCCC法纯化溶剂体系为正己烷-甲醇-水(1:2:1, V/V),得到的海地瓜总长链碱纯度在95%以上,与传统的硅胶柱层析方法相比,应用HSCCC法纯化长链碱溶剂消耗减少70%、纯化时间减少88%、样品得率提高了3.5倍,具有快捷高效等特点。3.对分离得到的海地瓜活性脂质和长链碱化合物进行了抗S-180肿瘤细胞活性研究。结果表明:海地瓜的5种活性脂质脂质体和水解获得的长链碱均具有显著抑制S-180细胞增殖的作用,且呈现明显的时间和剂量效应关系。其中海地瓜鞘脂的抗S-180细胞活性具有一定的构效关系。长链碱基团上多羟基结构的存在能够显著提高鞘脂的抗S-180肿瘤细胞活性;β-葡萄糖的存在也会增强鞘脂类抑制S-180细胞增殖的活性。水解获得的海地瓜长链碱化合物较天然存在的鞘脂类化合物的抗S-180肿瘤活性更强。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-11
0 前言  11-28
  0.1 海参资源概述  11
  0.2 海地瓜概述  11-13
  0.3 海参的药食同源价值  13
  0.4 海参脂质  13-20
    0.4.1 鞘脂类概述  14-20
      0.4.1.1 鞘脂类简介  14-15
      0.4.1.2 长链碱  15-17
      0.4.1.3 神经酰胺  17-18
      0.4.1.4 脑苷脂  18-20
    0.4.2 甾醇  20
  0.5 鞘脂类的分离纯化和结构鉴定  20-23
    0.5.1 鞘脂类的提取  21
    0.5.2 鞘脂类的分离纯化  21
    0.5.3 鞘脂类的结构鉴定  21-23
  0.6 高速逆流色谱法概述  23-26
    0.6.1 高速逆流色谱法原理  23-24
    0.6.2 高速逆流色谱仪  24-25
    0.6.3 高速逆流色谱法溶剂系统的选择  25-26
    0.6.4 高速逆流色谱的应用  26
  0.7 本研究的目的意义  26-28
1 海地瓜低极性活性脂质的分离纯化及结构鉴定  28-46
  1.1 实验材料和仪器  28-29
    1.1.1 原料  28
    1.1.2 主要实验试剂  28-29
    1.1.3 色谱柱及填料  29
    1.1.4 主要仪器设备  29
  1.2 实验方法  29-33
    1.2.1 海地瓜低极性脂质的分离纯化  29-30
    1.2.2 结构鉴定  30-33
  1.3 结果与讨论  33-45
    1.3.1 海地瓜神经酰胺的结构解析  33-36
    1.3.2 海地瓜脑苷脂的结构解析  36-42
    1.3.3 海地瓜甾醇硫酸盐的结构解析  42-44
    1.3.4 讨论  44-45
  1.4 本章小结  45-46
2 海地瓜长链碱的水解制备  46-56
  2.1 海地瓜长链碱的水解制备  47-50
    2.1.1 实验材料和仪器  47
    2.1.2 实验方法  47-49
    2.1.3 结果与讨论  49-50
  2.2 高速逆流色谱法制备海地瓜长链碱  50-55
    2.2.1 实验材料和仪器  50-51
    2.2.2 实验方法  51-52
    2.2.3 实验结果  52-54
    2.2.4 讨论  54-55
  2.3 本章小结  55-56
3 海地瓜低极性活性脂质及长链碱的抗 S-180 活性初探  56-64
  3.1 实验材料  56-57
    3.1.1 受试样品  56-57
    3.1.2 肿瘤细胞株  57
    3.1.3 试剂和药品  57
    3.1.4 仪器  57
  3.2 实验方法  57-58
    3.2.1 海地瓜低极性活性脂质脂质体的制备  57
    3.2.2 海地瓜长链碱溶液的制备  57-58
    3.2.3 MTT 法检测样品对S-180 细胞增殖的影响  58
    3.2.4 统计学处理  58
  3.3 实验结果  58-60
    3.3.1 海地瓜低极性活性脂质对 S-180 细胞增殖的影响  58-59
    3.3.2 海地瓜长链碱对 S-180 细胞增殖的影响  59-60
  3.4 讨论  60-63
  3.5 本章小结  63-64
4 结论  64-66
  4.1 总结  64-65
  4.2 本论文主要创新点  65-66
参考文献  66-73
附录  73-79
致谢  79-80
发表的学术论文和研究成果  80

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