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UGBP在博莱霉素致小鼠肺纤维化模型中的动态表达及机制的初步探讨

作　者: 汪沛
导　师: 罗自强
学　校: 中南大学
专　业: 生理学
关键词: UGBP TGF-β1 博莱霉素 肺纤维化
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


小鼠的子宫珠蛋白结合蛋白(uteroglobin-binding protein, UGBP,也称UG受体,uteroglobin receptor)可能与Clara细胞分泌蛋白(CCSP/UG)发挥其多功能的生物学活性有着密切的联系,但是当前对于UGBP在肺纤维化时的确切的表达模式特点及其生物学意义都还不明确,值得进一步研究。同时我们知道,TGF-β1在小鼠肺纤维化的发生发展中起着核心作用。提示TGF-β1信号通路对UGBP的转录调控可能与博莱霉素诱导小鼠肺纤维化中UGBP的变化有关。为此,本课题通过观察博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化时肺内UGBP基因和蛋白表达时间和空间模式的改变明确肺纤维化时UGBP的动态表达规律,并在此基础上观察在体外组织培养模型中阻断TGF-β1的作用时UGBP的变化初步探讨UGBP的表达改变机制。为进一步阐明肺纤维化发生发展过程中UGBP表达变化的分子机制和全面揭示UGBP转录调控原理的研究提供新的启示。方法：1.UGBP在腹腔注射BLM诱导的肺纤维化小鼠模型肺组织中的表达。50只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组(Con组)和肺纤维化模型组(D1、D6、D12、D18组),每组10只。除Con组外,其余各组采用腹腔注射BLM致小鼠肺纤维化模型,连续注射10天,此后分别于最后一次注射后的第1、6、12、18天处死各组小鼠,左肺上叶制成组织芯片行苏木素一伊红(HE), Masson胶原染色并运用免疫组织化学染色的方法观察UGBP蛋白在小鼠肺组织的表达,右肺及左肺下叶测定羟脯氨酸(HYP)的含量,RT-PCR法半定量测定UGBP、TGF-β1和前Ⅰ型胶原mRNA在肺内的表达。2. UGBP变化机制的初步探讨20只雄性昆明小鼠随机分为正常小鼠组(Con组),正常小鼠+TGF-β1受体拮抗剂组(Con+R0158组),肺纤维化模型组(B组),肺纤维化模型+TGF-β1受体拮抗剂组(B+R0 1 58组),每组5只。B组和B+R0158组采用腹腔注射BLM致小鼠肺纤维化模型,连续注射10天,于注射后第6天处死各组小鼠,分别将其肺切片至于Transwell板上培养,Con+R0158组和B+R0158组培基内加入TGF-β1受体拮抗剂(R0158),培养4天后收集组织用RT-PCR法半定量测定UGBP、TGF-β1和前Ⅰ型胶原mRNA在肺内的表达。结果：1.腹腔注射BLM肺纤维化模型成功,根据HE染色,胶原染色和羟脯氨酸的测定结果显示注射后第1、6、12、18天小鼠肺纤维化程度逐渐加重。2.免疫组织化学染色显示不同时期UGBP蛋白表达情况不同。经博莱霉素处理后第1天和第6天UGBP在气道上皮的表达有所增强,但在肺泡间质的表达仍较弱；第12天在气道上皮的表达变化不明显,但在纤维组织增生的部位有不均一的表达；第18天在气道上皮仍有强表达,并且在胶原纤维沉积的部位的表达更为显著。3.RT-PCR检测不同时期UGBP, TGF-β1,前Ⅰ型胶原,mRNA表达变化：TGF-β1的表达在博莱霉素处理后第6天开始显著高于正常组(P<0.05),12天时持续高表达,第18天表达最高(P<0.01)。前Ⅰ型胶原的表达在博莱霉素处理后第12天开始显著高于正常组(P<0.01),18天时持续高表达。正常对照组中UGBP仅为弱表达,而纤维化模型组UGBPmRNA表达在第1天开始升高,但升高程度没有统计学意义,第18天UGBP显著升高(P<0.05)。4.肺组织体外培养4天后RT-PCR检测各组UGBP, TGF-β1前Ⅰ型胶原mRNA表达变化：TGF-β1的表达在B组和B+R0158组显著高于正常对照组(P<0.01),B组和B+R0158组,Con和Con+R0158组之间没有显著性差异。B组前Ⅰ型胶原mRNA的表达显著高于正常对照组(P<0.01),B+R0158组前Ⅰ型胶原mRNA与B组相比显著下降(P<0.01),但仍高于正常对照组(P<0.05)。B组UGBP mRNA的表达显著高于正常对照组(P<0.01), B+R01 58组UGBP mRNA与B组相比显著下调(P<0.01),而和正常对照组之间相比没有统计学差异。结论：1.腹腔注射BLM后小鼠肺组织纤维化程度逐渐加重,UGBP在肺纤维化过程中表达升高,在肺内不同细胞UGBP表达的变化不同。2.肺纤维化过程中肺组织UGBP表达的上调可能与内源性TGF-β信号通路的激活有关。

全文目录


摘要  5-9
ABSTRACT  9-13
前言  13-15
第一章 材料与方法  15-21
  1. 材料  15-16
  2. 方法  16-21
第二章 结果  21-39
  1. UGBP在腹腔注射BLM诱导的肺纤维化小鼠模型肺组织中的表达  21-22
  2. UGBP变化机制的初步探讨  22-23
  3. 附图  23-39
第三章 讨论与结论  39-44
  1. 讨论  39-43
  2. 结论  43-44
参考文献  44-48
综述  48-65
  参考文献  56-65
致谢  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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