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白念珠菌药物敏感性试验及氟康唑相关耐药基因点突变的研究

作　者: 景伟芳
导　师: 王惠平
学　校: 天津医科大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 白念珠菌氟康唑 ERG11 TAC1 MRR1 UPC2 点突变
分类号: R519
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的了解白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的体外药物敏感性。收集白念珠菌氟康唑耐药株,检测相关耐药基因ERG11、TAC1、MRR1和UPC2的点突变,进一步了解ERG11、TAC1、MRR1和UPC2的点突变与唑类药物耐药之间的关系。方法收集不同来源临床标本,通过芽管形成试验、显色培养基和厚膜孢子试验鉴定白念珠菌。采用M27-A2微量肉汤稀释法,进行白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的体外药物敏感性试验。收集氟康唑耐药株,采用尿素裂解法提取DNA,PCR扩增及测序。对于ERG11,设计一对引物,测其全长；对于TAC1设计三对引物,分别包括5个点突变T225A、A736V、N972D、N977D和G980E；对于MRR1、设计两对引物,分别包括2个点突变P683S和G997V；对于UPC2,设计—对引物,包括2个点突变A643T和G648D。将PCR产物送交商业测序。结果共收集白念珠菌临床株506株。白念珠菌对氟康哗的敏感率为99.21%(502/506),剂量依赖敏感率为0.20%(1/506),耐药率为0.59%(3/506)；对伊曲康唑的敏感率为43.28%(219/506),剂量依赖敏感率为53.16%(269/506),耐药率为3.56%(18/506)；其中1株白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑交叉耐药。对于ERG11,11株白念珠菌氟康唑耐药株的9株中检测出了错义突变导致的8种氨基酸置换(突变率81.82%),分别是E266D(n=5)、D116E(n=3)、Y132H(n=2)、G448E(n=2)、Y132F(n=1)、K143Q(n=1)、T229A(n=1)和G464S(n=1)。其中K143Q此前未见文献报道。对于UPC2,11株菌中的2株检测出了错义突变导致的1种氨基酸置换(突变率18.18%),G648D(n=2)。对于TAC1和MRR1,11株菌中均未检测到相应的点突变。结论白念珠菌对唑类药物有耐药及交叉耐药现象,伊曲康唑耐药率高于氟康唑。但白念珠菌对氟康唑和伊曲康哗大多数菌株敏感而耐药株少,仍然可以用于临床上白念珠菌感染的治疗。伊曲康唑剂量依赖敏感的菌株较多,临床治疗时可以考虑加大用药剂量,以提高治疗效果。ERG11点突变与耐药的关系比较明确,但菌株突变的数目或分布模式都没有明显的规律性。TAC1、MRR1和UPC2的点突变与耐药的关系有待于进一步研究。白念珠菌对唑类药物耐药是多种分子机制共同作用的结果,因此今后应进一步探索和完善耐药产生的机制,为临床提供参考和理论依据。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-9
缩略语/符号说明  9-10
前言  10-13
  研究现状、成果  10-12
  研究目的、方法  12-13
一、白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的药物敏感性试验  13-24
  1.1 对象和方法  13-15
    1.1.1 对象  13-14
    1.1.2 方法  14-15
  1.2 结果  15-19
    1.2.1 白念珠菌分离鉴定结果  16-17
    1.2.2 质控菌株药物敏感性结果  17
    1.2.3 临床菌株药物敏感性结果  17-18
    1.2.4 标本来源分析  18-19
  1.3 讨论  19-23
    1.3.1 白念珠菌感染临床治疗现状  19-21
    1.3.2 体外药敏试验方法  21-22
    1.3.3 药物敏感试验与临床疗效之间的关系  22-23
  1.4 小结  23-24
二、白念珠菌耐氟康唑相关基因点突变的检测  24-44
  2.1 对象和方法  24-27
    2.1.1 对象  24
    2.1.2 方法  24-27
  2.2 结果  27-33
    2.2.1 PCR反应结果  27-28
    2.2.2 ERG11基因测序结果  28-31
    2.2.3 TAC1基因测序结果  31-32
    2.2.4 MRR1基因测序结果  32
    2.2.5 UPC2基因测序结果  32-33
    2.2.6 11株耐氟康唑白念珠菌点突变检测结果  33
  2.3 讨论  33-43
    2.3.1 唑类药物的作用机制  33-35
    2.3.2 白念珠菌对唑类药物的耐药机制  35-37
    2.3.3 ERG11点突变与耐药  37-39
    2.3.4 TAC1点突变与耐药  39-41
    2.3.5 MRR1点突变与耐药  41-42
    2.3.6 UPC2点突变与耐药  42-43
  2.4 小结  43-44
结论  44-45
参考文献  45-51
发表论文和参加科研情况说明  51-52
附录  52-53
综述白念珠菌对唑类药物耐药机制的研究进展  53-61
  综述参考文献  58-61
致谢  61

白念珠菌药物敏感性试验及氟康唑相关耐药基因点突变的研究

内容摘要

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