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胞嘧啶脱氨酶基因突变体D314A对人结肠癌细胞的抑制作用

作　者: 孙茂才
导　师: 沈历宗
学　校: 南京医科大学
专　业: 外科学
关键词: 胞嘧啶脱氨酶基因 点突变 自杀基因治疗 结肠癌
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 20次
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内容摘要


目的:构建大肠埃希菌胞嘧啶脱氨酶(E. Coli cytosine deaminase, EC-CD)基因突变体D314A(即EC-CD基因开放阅读框第314个氨基酸由天冬氨酸突变为丙氨酸)并研究其抗肿瘤作用。方法:构建含EC-CD基因的真核表达质粒pcDNA3.1-CDwt,应用点突变技术将pcDNA3.1-CD中EC-CD基因开放阅读框第314个氨基酸的碱基由A突变为C,即构成pcDNA3.1-CDD314A。用Lipofectamine? 2000将EC-CD基因或D314A基因转入人结肠癌细胞系LoVo细胞,以G418筛选出稳定表达的阳性克隆LoVo-CDwt及LoVo-CDD314A。应用MTT法检测EC-CD基因及D314A基因对LoVo细胞的直接杀伤作用及旁观者效应。结果:EC-CD基因突变体D314A经测序确认。LoVo细胞转染EC-CD基因及D314A基因后均能表达相应的mRNA,Lovo-CDD314A细胞对5-FC的IC50为85.13±0.60mmol/L,显著低于Lovo-CDwt细胞(689.76±0.45umol/L,P=0.000);在旁观者试验中当Lovo-CDwt细胞和Lovo-CDD314A细胞比例均为30%时,细胞存活率分别为48.5±0.49%与17.3±0.40%(P =0.000)。结论:EC-CD基因突变体D314A的抗肿瘤作用显著强于野生型EC-CD基因,有望成为新的肿瘤基因治疗候选基因。

全文目录


缩略语  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
引言  9-11
材料与方法  11-20
结果  20-25
分析与讨论  25-27
结论  27-28
参考文献  28-32
综述  32-41
  参考文献  37-41
己发表论文  41-42
致谢  42

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
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