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乙醇对小鼠睾丸组织的氧化应激损伤及其对生精细胞中Bcl-2/Bax表达的影响

作　者: 谢锋
导　师: 孙光
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 乙醇生精细胞氧化应激超氧化物歧化酶丙二醛 B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白 Bcl-2 相关X蛋白
分类号: R698.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：通过建立乙醇摄入雄性小鼠模型,观察小鼠睾丸组织氧化应激及生精细胞 Bcl-2/Bax的表达水平,初步探讨乙醇摄入对小鼠睾丸组织的氧化应激损伤及其与生精细胞凋亡的关系及酒精导致小鼠睾丸组织损伤的可能机制。方法：2月龄健康雄性昆明小白鼠(SPF级)48只,随机分为对照组(A组)、低浓度酒精组(B组)、高浓度酒精组(C组)、高浓度酒精+VitE (D组),每组12只,每日灌胃一次,每周测量一次体重,记录小鼠的一般状态。42天(3个生精周期)后处死,睾丸称重后,右侧睾丸制备成组织匀浆,通过分光光度计检测抗氧化指标SOD和氧化指标MDA水平的变化；左侧睾丸常规切片,HE染色观察大体结构,免疫组化(S-P法)检测Bcl-2/Bax在生精细胞中的表达情况,结果采用IHS评分,0-1分为(一),2-3分为弱阳性(+),4-6分为中等阳性(++),>6分为强阳性(+++)。利用SPSS17.0软件进行统计分析,以P<0.05为有统计学意义。结果：1)一般指标：实验期间对照组小鼠食欲正常,精神状态好,各酒精灌胃组小鼠出现醉酒现象,随酒精剂量增加,醉酒现象表现愈明显。试验结束时,各组小鼠体重均有增长,对照组(A组)小鼠平均体重增加最多,高浓度白酒组(C组)平均体重增加最少；各组间小鼠体重增长有明显差异(P<0.01),随酒精浓度的增加,小鼠体重增加逐渐减少。加用VitE组(D组)体重增长大于高浓度组(C组)。各组小鼠睾丸重量系数无明显差别。2)氧化应激的变化：与对照组相比,低浓度酒精组(B组)MDA含量增多(P<0.05), SOD活性升高(P<0.05)；高浓度酒精组(C组)MDA含量明显增多(P＜0.01), SOD活性明显降低(P<0.01),且随酒精摄入浓度的增高,MDA水平不断增高。与对照组相比,高浓度酒精+VitE组(D组)MDA含量增多(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05);但与C组相比,其MDA含量降低(P＜0.05), SOD活性升高(P<0.05)。3)组织学的变化：常规切片HE染色显示,对照组睾丸组织生精上皮内生精细胞排列有序,形态正常；而酒精摄入组生精上皮内生精细胞排列紊乱,可见部分生精细胞脱落,生精细胞和精子数量减少,并可见较多的多核巨细胞。随着酒精浓度的增加,生精上皮的厚度有减小的趋势。高浓度酒精摄入+Vit E组(D组)在生精上皮厚度、生精细胞数量及形态结构等方面,较同剂量的酒精组(C组)为轻。4)Bcl-2/Bax的表达：免疫组化结果显示Bcl-2/Bax在各组睾丸组织中均有表达。与对照组相比,各酒精摄入组Bcl-2的表达下调,且随着酒精剂量的增加,其表达降低；Bax的表达上调,随着酒精剂量的增加,其表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高浓度酒精组(C组)相比,高浓度酒精+VitE组(D组)Bcl-2的表达增加,Bax的表达降低(P<0.05)；但其Bcl-2表达仍较对照组降低,Bax表达较对照组升高(P<0.05)。酒精摄入组小鼠睾丸组织MDA含量与Bax表达呈显著正相关(r=0.938, P＜0.01)、与Bcl-2表达呈显著负相关(r=-0.899,P<0.01)。结论：1)过量饮酒可致成年小鼠睾丸组织发生氧化应激反应,这可能是睾丸组织损伤和生精细胞凋亡的原因之一。VitE可以降低酒精摄入小鼠睾丸组织的氧化应激损伤。2)饮酒导致小鼠睾丸组织Bcl-2表达水平下降,Bax的表达水平升高,推测洒精摄入造成小鼠睾丸组织氧化应激损伤,通过Bcl-2/Bax表达的变化调控线粒体介导的细胞凋亡通路,引起生精细胞凋亡,造成睾丸组织损伤。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-12
缩略语/符号说明  12-13
前言  13-15
  研究现状、成果  13-14
  研究目的、方法  14-15
一、乙醇对小鼠睾丸组织氧化应激的研究  15-29
  1.1 对象和方法  15-19
    1.1.1 实验对象  15-16
    1.1.2 实验方法与检测指标  16-19
    1.1.3 统计学处理  19
  1.2 结果  19-22
    1.2.1 乙醇对小鼠一般状况的影响  19
    1.2.2 乙醇对小鼠体重变化的影响  19-20
    1.2.3 小鼠睾丸重量系数的变化  20
    1.2.4 乙醇对小鼠睾丸组织氧化应激的变化  20-22
  1.3 讨论  22-28
    1.3.1 乙醇摄入氧化应激动物模型的建立及评价  23-24
    1.3.2 乙醇与氧化应激  24-25
    1.3.3 睾丸组织与氧化应激  25
    1.3.4 氧化应激标志物的选择  25-26
    1.3.5. 乙醇摄入小鼠与睾丸组织氧化应激的结果分析  26-28
  1.4 小结  28-29
二、乙醇对小鼠生精细胞 Bcl-2和Bax表达的影响  29-40
  2.1 对象和方法  29-31
    2.1.1 实验对象  29
    2.1.2 实验方法  29-31
    2.1.3 统计学处理  31
  2.2 结果  31-34
    2.2.1 睾九组织病理学观察结果  31-32
    2.2.2 免疫组化检测Bcl-2的表达  32-33
    2.2.3 免疫组化检测Bax的表达  33-34
  2.3 讨论  34-39
  2.4 小结  39-40
结论  40-41
参考文献  41-46
发表论文和参加科研情况说明  46-47
综述氧化应激和细胞凋亡  47-63
  综述参考文献  57-63
致谢  63

乙醇对小鼠睾丸组织的氧化应激损伤及其对生精细胞中Bcl-2/Bax表达的影响

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