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利用siRNA抑制胃癌SGC-7901细胞c-Met基因的研究

作　者: 廖晓南
导　师: 孙培春
学　校: 郑州大学
专　业: 外科学
关键词: c-Met RNA干扰 胃癌 人胃癌SGC-7901细胞
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景和目的胃癌是世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤,具有发病率高、死亡率高、早期诊断率低,生存率低等特点。目前主要对于进展期胃癌治疗以手术切除为主化疗为辅,但存在效率低,复发率高,易耐药等诸多问题。因此,寻求副反应更小治疗效果更好的方法势在必行。随着对胃癌及发病机制研究的逐渐深入,人们认识到胃癌的发展是一个多步骤、多阶段及多因素参与的疾病,而癌基因的激活与胃癌的发生发展密切相关,抑制癌基因的突变、过度表达可以防止正常细胞向恶性转化,从而达到治疗肿瘤的目的。因此,基因水平治疗成为近年来胃癌治疗关注的热点。原癌基因c-Met所编码的蛋白质属酪氨酸激酶(protein-tyrosine kinases, PTKs)家族的一员,是肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor, HGF)特异性受体。研究发现,c-Met在胃癌中持续异常高表达,异常表达的c-Met激活下游效应分子导致诱发肿瘤细胞增殖分裂,粘附浸润,促进肿瘤血管形成,在肿瘤的发生发展、转移浸润中具有重要作用。RNA干扰(RNA interference, RNAi)是将与靶基因的mRNA同源互补的双链RNA(dsRNA)导入细胞,能特异性地降解该mRNA,从而产生相应的功能表型缺失,属于转录后水平的基因沉默(post-transcriptional gene silencePTGS)。RNA干扰(RNAi)技术是近年来发展起来的一项新技术,可特异而有效地阻断目的基因的表达,在细胞内导致与其序列同源的mRNA分子发生特异性降解,从而达到肿瘤治疗的目的。与传统的基因疗法相比,RNA干扰其特有的高效、特异、副作用小操作简单等突出的优势,成为基因治疗的新策略。本实验利用RNA干扰技术抑制胃癌细胞株SGC-7901中c-Met基因的表达,比较转染前后c-Met基因：nRNA表达水平、蛋白表达水平以及胃癌细胞增殖能力的变化,探讨采用RNA干扰技术沉默c-Met基因表达对胃癌细胞生物学的影响,为胃癌治疗提供新的方法和思路。材料和方法1.人胃癌SGC-7901细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞库,置于含有10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液中,37℃,5%CO2,湿度80%环境中培养。根据人c-Met基因的cDNA编码序列,由上海吉玛制药有限公司设计并合成三个靶基因序列。2.利用脂质体Lipofectamine TM 2000介导,将特异性c-Met-siRNA转染入人胃癌细胞株SGC-7901细胞,并设置阴性对照组和空载体组,及空白对照组。3.转染48小时后,倒置显微镜下观察各组细胞转染后的形态学变化利用RT-PCR方法检测SGC-7901细胞中的c-Met mRNA表达变化；Western blot方法检测蛋白表达改变情况；MTT比色法检测细胞增殖情况的变化,并绘出对应转染细胞的生长曲线。结果1. RT-PCR和Western blot方法检测转染c-Met-siRNA后SGC-7901细胞中c-Met的mRNA和蛋白表达均较对照组显著降低(p<0.05)。2.倒置显微镜下观察发现,在转染后48小时,转染c-Met-siRNA组,细胞增殖明显减少,细胞数量减少,细胞聚集情况明显抑制。3.MTT结果显示,24、48、72和96小时四个时间段细胞的OD值,实验组与阴性对照组和空白对照组比较均有差异(p<0.05),实验组细胞增殖能力明显减弱,且效果在48小时最显著,此时其增殖能力抑制率>50%。结论1.利用阳离子脂质体Lipofectamine TM 2000介导,使c-Met-siRNA成功转染入人胃癌SGC-7901细胞。2. c-Met-siRNA转染入人胃癌SGC-7901细胞后,能有效抑制各实验组中c-Met基因mRNA及蛋白的表达,并有效抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖能力。3.RNA干扰技术成功抑制c-Met基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达,为治疗胃癌实验提供基础,这一技术有望成为胃癌基因治疗的新策略。

全文目录


摘要  4-7
Abstract  7-11
前言  11-12
材料和方法  12-28
结果  28-31
讨论  31-36
结论  36-37
参考文献  37-39
附图  39-41
综述  41-61
  参考文献  55-61
缩略词索引  61-62
个人简历  62-63
在学期间发表的学术论文  63-64
致谢  64

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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