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根据细胞周期序贯联合免疫抑制剂对肾小球疾病影响的研究

作　者: 王晨丹
导　师: 李荣山
学　校: 山西医科大学
专　业: 内科学
关键词: 阿霉素肾病大鼠 细胞周期 序贯用药 甲基强的松龙 环磷酰胺 环孢素 霉酚酸酯 他克莫司 雷帕霉素
分类号: R692.6
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:1.建立阿霉素肾病大鼠模型,目的为建立临床表现和病理特点与人类肾小球疾病相似的大鼠模型。2.将免疫抑制剂根据细胞周期序贯组合成不同的方案,应用于阿霉素肾病大鼠模型,观察肾脏病理改变、24小时尿蛋白定量、血生化指标的变化,以及对足细胞相关因子、肾组织纤维化相关因子的影响,并探讨其作用机理,为临床上联合应用免疫抑制剂治疗肾小球疾病提供新思路。3.比较环孢素A与霉酚酸酯序贯及联合用药对阿霉素肾病大鼠的影响。4.建立根据细胞周期序贯联合使用免疫抑制剂治疗肾小球疾病的临床方案,进行病例收集,观察临床疗效。方法:1.采用首次大剂量（6mg/kg）冲击诱导,一周后小剂量（4mg/kg）给药的方法建立FSGS肾病大鼠模型;以丽春红S法检测24h尿蛋白定量;全自动生化仪检测血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、胆固醇（Chol）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）的变化;光镜、电镜观察肾脏病理变化;双抗体夹心ELISA方法检测血清基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、转化生长因子-β1（TGF-β1）;免疫组化方法检测纤维连接蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）和结缔组织生长因子（CTGF）的表达。2.设正常对照组（8只）、肾病组（8只）、MP+CsA+MMF治疗组（8只）、MP+CsA+CTX治疗组（8只）和MP+FK506+Rapa治疗组（8只）;以丽春红S法检测24h尿蛋白定量,全自动生化仪检测血清TP、ALB、Chol、TG、BUN、Scr;光镜观察肾组织病理变化;双抗体夹心ELISA方法检测血清MMP-2、MMP-9、TGF-β1;Westernblot方法检测CTGF的表达;免疫组化、免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR检测足细胞nephrin、podocin和CD2相关蛋白的表达。3.设正常对照组（8只）、肾病组（8只）、MP+CsA+MMF序贯治疗组（8只）、MP+CsA+MMF联合治疗组（8只）;以丽春红S法检测24h尿蛋白定量;全自动生化仪检测血清TP、ALB、Chol、TG、BUN、Scr及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）;光镜观察肝、肾组织病理变化。4.在临床上收集行肾穿刺活检术后明确为原发性肾小球疾病的病理类型,临床表现为肾病综合征,对激素依赖或抵抗的患者入组,根据个体情况选择序贯治疗方案,监测尿液分析和红细胞位相、24h尿蛋白定量,及血清TP、ALB、Chol、TG、ALT、AST、BUN、Scr,血药浓度等并跟踪随访,观察疗效。结果:1.造模组大鼠24h尿蛋白定量进行性增加8周末达高峰。造模组大鼠在2周末、4周末、8周末和12周末与对照组相比,TP、ALB随时间延长逐渐降低,TP在8周末最低;TG、Chol随时间逐渐升高,TG在8周末最高;BUN、Scr无明显变化。造模组在12周末可见部分肾小球出现局灶节段性硬化。造模组随着时间延长,血清中TGF-β1的含量升高,4周末达高峰;MMP-2、MMP-9逐渐降低;肾组织FN、LN和CTGF的表达和分布范围均显著增加。2.肾病组24h尿蛋白定量与对照组比较,2周末、4周末、8周末、12周末均明显高于对照组（P<0.01）,三治疗组大鼠24h尿蛋白定量在8周末、12周末均明显低于肾病组（P<0.05）,治疗组之间无统计学差异（P>0.05）,但高于对照组。肾病组TP、ALB明显低于对照组（P<0.01）,肾病组TG、Chol明显高于对照组（P<0.01）,治疗组TP、ALB明显高于肾病组（P<0.05）,治疗组TG、Chol明显低于肾病组（P<0.05）,治疗组之间各生化指标均无显著差异。治疗组肾脏病理较肾病组有所改善。三组治疗方案均可降低大鼠血清中TGF-β1的含量,增加MMP-2和MMP-9的含量,同时抑制CTGF蛋白的表达,其中尤其以MP+ FK506+Rapa组合方案抑制纤维化效果显著。肾病组大鼠nephrin和podocin蛋白及其mRNA的表达均明显减少,实时荧光定量RT-PCR检测CD2APmRNA也明显减少;三治疗组nephrin、podoein和CD2AP的表达和分布均有所恢复。3.比较CsA和MMF联合和序贯用药方案,两者均可有效减低肾病大鼠的尿蛋白;均可升高TP和ALB,减少TG和Chol;改善肾病大鼠的肾脏病理;但联合用药组对肾病大鼠产生肝毒性。结论:1.造模组在12周末可见部分肾小球出现局灶节段性硬化。2.根据细胞周期序贯用药方案对阿霉素肾病大鼠的病理变化均有显著改善,可以有效减少阿霉素肾病大鼠的尿蛋白;升高TP和ALB,减少TG和Chol;可以恢复nephrin、podocin和CD2AP在阿霉素肾病大鼠肾脏中的表达;并能降低大鼠血清中TGF-β1,增加MMP-2和MMP-9的含量,同时抑制CTGF蛋白的表达,明显改善肾脏纤维化。3.CsA和MMF根据细胞周期序贯用药可以有效避免不良反应的发生,安全性优于联合用药组。4.临床上根据细胞周期序贯联合使用免疫抑制剂治疗肾小球疾病,疗效良好,尚需进一步收集病例来验证。

全文目录


中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
英文缩略词表  10-12
前言  12-17
  参考文献  15-17
第一部分 阿霉素诱发FSGS 肾病大鼠模型的研究  17-39
  材料和方法  17-32
  讨论  32-35
  结论  35-36
  参考文献  36-39
第二部分 根据细胞周期序贯应用免疫抑制剂对阿霉素肾病大鼠的影响  39-70
  材料与方法  39-46
  结果  46-60
  讨论  60-64
  结论  64
  问题与展望  64-65
  参考文献  65-70
第三部分 比较环孢素与霉酚酸酯序贯及联合用药对阿霉素肾病大鼠的影响  70-82
  材料与方法  70-77
  讨论  77-79
  结论  79-80
  参考文献  80-82
第四部分 免疫抑制剂根据细胞周期序贯联合临床用药方案的建立  82-95
  一、理论基础  82
  二、选择临床用药对象  82-83
  三、检测指标  83
  四、选用以下三种联合为治疗方案  83-84
  五、治疗药物浓度的监测  84
  六、临床病例搜集  84-92
  结论  92-93
  参考文献  93-95
综述  95-103
  参考文献  101-103
个人简历  103-104
致谢  104

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学（泌尿生殖系疾病） > 肾疾病 > 肾小管、肾小球疾病
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