学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

花椒种质资源ISSR研究

作　者: 汉素珍
导　师: 王有科
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 森林经理学
关键词: 花椒 ISSR-PCR 正交设计遗传多样性聚类分析
分类号: S573.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 37次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxim）为芸香科（Rutaceae）花椒属落叶小乔木或灌木,是目前退耕还林中重要的生态型经济树种。在甘肃,由于长期的进化和驯化,花椒形成了诸多品系,如大红袍、小红袍、梅花椒、豆椒、枸椒、六月椒、八月椒等,其分类依据各不相同,叫法颇多。反映在科研与生产上存在着品种混杂、名称混淆等问题。目前,花椒的研究主要集中在栽培和生理方面,分子生物学方面进行过同工酶研究,RAPD技术研究,但是ISSR技术目前未见报道,极大的限制了花椒种质资源开发利用。本研究以甘肃主产的11个花椒品种为材料,采用ISSR技术和正交试验,结合SPSS及POPGENE等软件从分子水平对甘肃省花椒资源的亲缘关系以及遗传多样性进行分析,为花椒新品种的培育提供遗传背景,为花椒种质资源的保护和合理利用提供科学依据。主要研究结果如下:（1）采用正交设计对影响花椒ISSR-PCR反应体系的4个因素（TaqDNA聚合酶,Mg2+,dNTP,引物）在3个水平上进行优化试验。选用L9（34）正交设计方案,获得影响因素的最佳组合。结果表明,适宜花椒ISSR-PCR反应的最佳体系为:20μL的反应体系中,Taq酶1.0U,Mg2+ 2.0 mmol·L^-1,dNTP 0.2mmol·L^-1,引物1.0μmol·L^-1,10×PCR buffer2.5μL,50 ng模板DNA。并通过梯度试验,确定了引物的最佳退火温度和最适宜循环次数。（2）从100条ISSR引物中筛选出10条适宜于花椒扩增的引物,10条引物共产生131个DNA条带,其中112个多态性条带,占85.5%。平均有效等位基因数1.4664,平均Nei’s基因多样性指数0.2230,平均Shannon信息指数0.3028,不同花椒品种间表现出较丰富的遗传多样性。（3）使用POPGENE软件对不同花椒品种进行UPGMA聚类显示,在遗传相似系数为0.675时,秦安大红袍、秦安1号和豆椒聚为一类,枸椒、油椒、梅花椒、武都大红袍、二红袍、八月椒和叶里藏聚为一类,而川陕花椒单独为一类。以相似系数0.73为阈值,又可将第Ⅱ类的7个品种分为3类,第1类为枸椒、二红袍、八月椒和油椒;第2类为梅花椒;第3类为武都大红袍和叶里藏。（4）供试花椒的遗传多样性较为丰富,根据多态位点百分数,Nei’s基因多样性指数和Shannon信息指数及遗传分化指数所估计的11个花椒品种中秦安大红袍和武都大红袍表现出较丰富的遗传多样性,秦安1号表现出较低的遗传多样性,不同品种花椒之间的遗传多样性差异较大。

全文目录

摘要  2-4
SUMMARY  4-6
缩略语表  6-9
第一章文献综述  9-20
  1.1 花椒研究概述  9-12
    1.1.1 生物学性状  9
    1.1.2 栽培管理研究概况  9-10
    1.1.3 化学成分的提取及研究  10-11
    1.1.4 药用价值及药理作用的研究  11
    1.1.5 生理生化研究  11-12
    1.1.6 遗传多样性研究  12
  1.2 分子标记的种类及在遗传育种中的应用  12-18
    1.2.1 几种常见的分子标记  12-15
    1.2.2 ISSR 分子标记的原理和特点  15-16
    1.2.3 ISSR 标记在植物研究中的应用  16-18
  1.3 本研究的目的和意义  18-20
第二章材料与方法  20-26
  2.1 实验材料及仪器、试剂  20-21
    2.1.1 实验材料  20
    2.1.2 主要实验仪器  20-21
    2.1.3 主要试剂及配制  21
  2.2 实验方法  21-26
    2.2.1 花椒基因组DNA 的提取与检测  21-22
    2.2.2 ISSR 引物筛选及体系优化  22-23
    2.2.3 琼脂糖凝胶电泳  23-24
    2.2.4 数据统计与分析  24-26
第三章结果与分析  26-36
  3.1 花椒基因组DNA 提取与检测  26
  3.2 ISSR 正交实验体系优化  26-31
    3.2.1 TaqDNA 聚合酶用量对ISSR-PCR 的影响  27
    3.2.2 Mg~(2+)浓度对ISSR-PCR 反应的影响  27-28
    3.2.3 dNTP 浓度对 ISSR-PCR 反应的影响  28
    3.2.4 引物浓度对ISSR-PCR 反应的影响  28-29
    3.2.5 模板DNA 浓度对 ISSR-PCR 的影响  29
    3.2.6 退火温度对ISSR-PCR 反应的影响  29-30
    3.2.7 循环次数对ISSR-PCR 反应的影响  30-31
  3.3 ISSR-PCR 扩增结果  31-36
    3.3.1 引物筛选及扩增结果  31-33
    3.3.2 遗传相似系数  33
    3.3.3 群体内遗传多样性  33-34
    3.3.4 群体间遗传分化与基因流  34
    3.3.5 聚类  34-36
第四章结论与讨论  36-40
  4.1 讨论  36-39
    4.1.1 花椒ISSR-PCR 体系的建立  36
    4.1.2 花椒的指纹图谱及多态性位点  36-37
    4.1.3 花椒的遗传多样性  37-39
  4.2 结论  39-40
致谢  40-41
参考文献  41-47
个人简介  47-48
导师简介  48-49

花椒种质资源ISSR研究

内容摘要

全文目录

相似论文