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不同中药对3种细菌耐药质粒的消除作用研究

作　者: 马驰
导　师: 林居纯
学　校: 四川农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 中药细菌耐药质粒消除
分类号: S853.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

随着抗菌药物的不合理使用,细菌对抗菌药物的耐药性日趋严重和复杂。多重耐药菌大量出现,使得耐药性问题成为威胁全球医学及公共卫生的严重问题。研究表明,获得耐药质粒是细菌产生耐药性最为普遍的机制,由质粒介导的耐药性能伴随耐药质粒的消除而逆转。本研究以大肠杆菌等3种不同临床多重耐药菌为靶细菌,观察不同单味及复方中药对不同细菌耐药质粒的消除作用,以达到逆转细菌耐药性的目的。本研究采用煎煮法提取43种中药有效成分；采用改良肉汤稀释法和钢管扩散法测定43种中药水煎剂分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌标准菌株及其临床菌株的体外抑菌作用。结果表明：43种药物中,葛根、芦根、金钱草、甘草、麻杏石甘汤及白虎汤对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌均无体外抑菌作用；黄芩、黄连、连翘、蛇莓、五味子、五倍子、乌梅、三黄汤、黄连解毒汤、泻心汤、黄芩汤对以上三类细菌标准菌株和临床菌株均有良好的抑菌作用,抑菌范围较广；其余26种中药对不同细菌呈现不同的抑菌活性。采用肉汤二倍稀释法与影印培养法,研究单味中药及复方中药对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌临床多重耐药菌株的体外R质粒消除作用,同时设立十二烷基硫酸钠(SDS)和空白对照组。研究结果表明：(1)黄连解毒汤对大肠杆菌耐药性具有较强的消除作用,消除率(6.4-7.6%)显著或极显著高于SDS(2.0-2.8%),酸浆草对大肠杆菌耐药性无消除作用；五倍子、三黄汤、泻心汤、黄连解毒汤、双黄连汤对沙门氏菌耐药性具有较强的消除作用,消除率(2.7-13.4%)显著或极显著高于SDS(1.3-2.2%),葛根芩连汤对沙门氏菌耐药性无消除作用；黄芩、连翘、大黄、五倍子、三黄汤、泻心汤、黄连解毒汤、黄芩汤、双黄连汤对金黄色葡萄球菌耐药性具有较强的消除作用,消除率(2.5-6.4%)显著或极显著高于SDS(1.2%),黄柏、酸浆草、葛根芩连汤对金黄色葡萄球菌耐药性无消除作用；其余中药对不同细菌耐药性呈现不同的消除作用。(2)复方中药与其君药对耐药性消除作用比较发现,除黄芩汤对细菌耐药性的消除作用与黄芩无显著性差异外,泻心汤、黄连解毒汤、双黄连汤对不同细菌耐药性消除效果优于其君药。(3)经中药体外作用后,耐药性消除子均丢失1-3条质粒带(1400-21000bp),且恢复对2-11种抗菌药物的敏感性。在无抗菌药物的选择性压力作用下,由质粒介导产生的耐药性随着质粒的丢失而消除,且不再恢复。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
第一章文献综述、立题依据与意义  11-20
  1. 文献综述  11-18
    1.1 细菌耐药性的现状  11-12
    1.2 耐药性的产生与影响因素  12
    1.3 耐药质粒的研究进展  12-14
    1.4 质粒介导耐药性传播的分子机制  14-15
    1.5 耐药质粒的消除研究进展  15-18
  2. 立题依据与意义  18-20
第二章中药对不同细菌的体外抑菌作用研究  20-37
  1 材料与方法  20-24
    1.1 试验材料  20-21
      1.1.1 供试菌株  20
      1.1.2 试验药品  20
      1.1.3 培养基及相关试剂  20-21
      1.1.4 主要试验仪器  21
    1.2 试验方法  21-24
      1.2.1 各种培养基的制备  21
      1.2.2 中药水煎液的制备  21-22
      1.2.3 不同中药的体外抑菌作用研究  22-24
  2. 结果  24-33
    2.1 不同中药对3种标准菌株的抑菌作用结果  24-30
      2.1.1 单味中药及复方中药对3种标准菌株MIC的测定结果  24-26
      2.1.2 单味中药及复方中药对3种标准菌株抑菌圈的测定结果  26-30
    2.2 单味中药与复方中药抑菌作用的差异性比较  30-31
    2.3 不同中药对临床耐药菌株的抑菌作用结果  31-33
      2.3.1 不同中药对大肠杆菌临床菌株的抑菌作用结果  31
      2.3.2 不同中药对金黄色葡萄球菌临床菌株的抑菌作用结果  31-32
      2.3.3 不同中药对沙门氏菌临床菌株的抑菌作用结果  32-33
  3. 讨论  33-37
    3.1 药敏实验方法比较  33-34
    3.2 中药对细菌的抑菌作用  34-37
第三章中药对不同细菌耐药质粒的消除作用研究  37-68
  1 材料与方法  37-43
    1.1 试验材料  37-39
      1.1.1 供试菌株  37
      1.1.2 试验药品  37-38
      1.1.3 培养基及相关试剂  38
      1.1.4 主要试验仪器  38-39
    1.2 试验方法  39-43
      1.2.1 主要试剂的配制  39-40
      1.2.2 中药对不同耐药菌株的亚抑菌浓度测定  40
      1.2.3 细菌耐药性的消除  40-41
      1.2.4 消除子的筛选与鉴定  41-42
      1.2.5 细菌质粒的提取  42-43
      1.2.6 消除子的稳定性变化  43
      1.2.7 统计学分析  43
  2. 结果  43-63
    2.1 不同中药对不同临床细菌耐药性消除作用的研究  43-53
      2.1.1 不同中药对大肠杆菌临床菌株的耐药性消除  43-47
      2.1.2 不同中药对沙门氏菌临床菌株的耐药性消除  47-51
      2.1.3 不同中药对金黄色葡萄球菌临床菌株的耐药性消除  51-53
    2.2 细菌耐药性消除前后的耐药表型变化  53-60
      2.2.1 E1耐药性消除前后的耐药表型变化  53-54
      2.2.2 E2耐药性消除前后的耐药表型变化  54-55
      2.2.3 E3耐药性消除前后的耐药表型变化  55-56
      2.2.4 S1耐药性消除前后的耐药表型变化  56-57
      2.2.5 S2耐药性消除前后的耐药表型变化  57-58
      2.2.6 S3耐药性消除前后的耐药表型变化  58-59
      2.2.7 SA1耐药性消除前后的耐药表型变化  59-60
    2.3 消除作用前后菌株的质粒抽提检测结果  60-63
      2.3.1 大肠杆菌R质粒消除前后质粒图谱变化情况  60-61
      2.3.2 沙门氏菌R质粒消除前后质粒图谱变化情况  61-62
      2.3.3 金黄色葡萄球菌R质粒消除前后质粒图谱变化情况  62-63
    2.4 不同菌株耐药消除的稳定性测试结果  63
  3. 讨论  63-68
    3.1 不同中药对细菌耐药性的消除作用  63-65
    3.2 细菌耐药性消除前后的耐药表型变化  65-66
    3.3 细菌质粒提取方法  66
    3.4 细菌耐药性消除前后的质粒图谱变化  66-67
    3.5 不同菌株的耐药消除稳定性测试结果  67
    3.6 关于中药消除耐药质粒机理的探讨  67-68
第四章结论  68-69
参考文献  69-75
致谢  75-76
附录  76-80

不同中药对3种细菌耐药质粒的消除作用研究

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