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鹅α干扰素作为小鹅瘟VP3基因疫苗佐剂的研究

作　者: 唐卫杰
导　师: 刘菲；汪铭书
学　校: 四川农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鹅IFN-α真核表达质粒 COS-7细胞 GPV VP3基因疫苗 分子佐剂
分类号: S858.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 58次
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内容摘要


为了研究鹅α干扰素(goIFN-a)的免疫佐剂效应,构建了真核表达质粒(pcDNA-goIFN-a),在COS-7细胞中表达后,检测其对GPV VP3基因疫苗的佐剂作用,将鹅α干扰素真核表达质粒(pcDNA-goIFN-a)以每只50、100、200μg三个剂量与GPV VP3基因疫苗一起用肌肉注射法分别免疫28日龄鹅,同时设分子佐剂gIL2对照组、分子佐剂goIFN-a与gIL2联合免疫佐剂组、pcDNA3.1(+)对照组、生理盐水阴性对照组及小鹅瘟弱毒疫苗对照组,从接种后第3、7、14、21、28、35、49d开始采抗凝血借助淋巴细胞增殖的试验(MTT法)来检测鹅的外周血T淋巴细胞转化水平；从第3、7、14、21、28、35、49、63、77 d开始采凝血运用间接ELISA法来确定鹅的血清抗体水平。获得如下结果：1.鹅IFN-α的表达检测重组质粒能够在COS-7细胞内有效表达,在转染6h后就能检测出目的蛋白,蛋白表达量快速增加,在36h后,速度变缓。2.淋巴细胞对Con A的反应能力(OD值)pcDNA-goIFN-a以不同剂量与GPVVP3基因疫苗一起免疫鹅后,各实验组的T淋巴细胞增殖反应在免疫后的第3d处于同一水平,从第3d到第28d开始稳步上升,并在28d达到了最高峰,而基因疫苗pcDNA-VP3组在第35d达到高峰。在第28d,佐剂组的OD值均极显著(P≤0.01)高于pcDNA-VP3基因疫苗组、GPV弱毒组、pcDNA3.1(+)和生理盐水对照组。goIFN-a佐剂组只在第21、35和49d显著(P≤0.05)高于gIL2佐剂组,其他时间点差异不显著。联合佐剂组在第28和35d均显著高于goIFN-a或gIL2佐剂组(P<0.05)。3.外周血抗体IgG水平(OD值)佐剂免疫组的ELISA抗体水平从免疫后的第3d起,其增长趋势为先慢后快,至第35d到达最大值,之后逐渐降低,但仍明显高于pcDNA-VP3基因疫苗组和GPV弱毒组。gIL2佐剂组在第28、49和77d显著高于goIFN-a佐剂免疫组(P<0.05), goIFN-a和gIL2联合佐剂免疫组在第29d到第50d极显著高于goIFN-a或gIL2单独佐剂免疫组(P≤0.01)。在goIFN-a佐剂组中,随佐剂剂量的不同呈现一定的剂量相关性。综上所述,goIFN-a能够在COS-7细胞中表达,pcDNA-goIFN-a能使GPV VP3基因疫苗诱导的T淋巴细胞转化能力增强,外周血清抗体的IgG水平升高,可以看出其是一种良好的能够增强GPV VP3基因疫苗效果的分子佐剂,分子佐剂goIFN-a和goIL2联合免疫组效果最佳,pcDNA-goIFN-a肌肉注射200μg/只的效果次之。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-9
第一章 文献综述  9-15
  1 IFN-α干扰素的基本特征及分类  9-10
  2 IFN-α生物学活性  10
  3 IFN-α作为免疫佐剂的机制  10-11
  4 细胞因子类佐剂的应用研究  11-12
  5 IFN-α作为疫苗佐剂的应用研究  12-13
  6 禽类α干扰素的研究进展和应用研究  13-14
  7 实验的目的和意义  14-15
第二章 鹅α干扰素佐剂作用的研究  15-46
  1 实验材料  15-16
    1.1 菌种/细胞/毒株/实验动物  15
    1.2 主要酶  15
    1.3 主要试剂/配制  15
    1.4 主要仪器  15-16
  2 实验方法  16-29
    2.1 真核表达载体的构建  16-22
    2.2 pcDNA3.1-goIFN-α转染COS-7细胞及表达检测  22-24
    2.3 分子佐剂和基因疫苗大量制备和纯化  24-27
    2.4 实验动物的分组及免疫  27
    2.5 血样的采集和处理  27-28
    2.6 外周血清IgG的检测  28
    2.7 外周血淋巴细胞转化试验  28-29
  3. 实验结果  29-41
    3.1 pcDNA3.1-goIFN-α表达载体的构建  29-30
    3.2 GoIFN-α基因表达产物在COS-7细胞中的定位  30-31
    3.3 GoIFN-α基因表达产物在细胞上清液中的检测  31-32
    3.4 间接ELISA检测鹅免疫GPV VP3基因疫苗和佐剂后的IgG动态变化结果  32-35
    3.5 鹅免疫GPV VP3基因疫苗和佐剂后淋巴细胞增殖试验检测结果  35-41
  4. 讨论  41-45
    4.1 外源蛋白goIFN-α在COS-7细胞中的表达  41
    4.2 鹅免疫GPV VP3基因疫苗及佐剂后外周血T淋巴细胞转化效果  41-42
    4.3 鹅免疫GPV VP3基因疫苗及佐剂后血清抗体IgG的动态变化  42
    4.4 IFN-α的分子免疫佐剂的功能  42-45
  5 结论  45-46
参考文献  46-53
致谢  53

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鹅
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