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药物作用后细胞表面超微结构的AFM观察

作　者: 徐彦芳
导　师: 蔡继业
学　校: 暨南大学
专　业: 无机化学
关键词: 原子力显微镜(AFM) MTT 胰岛 5-Fu/壳聚糖微球 aFGF NIH/3T3细胞 COS-7细胞
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

应用原子力显微镜对生物样品进行高分辨超微结构的观察研究，并取得以下研究成果： (一)利用了AFM详细观察了体外培养小鼠胰岛的表面形态和超微结构，胰岛细胞表面形貌的特征表现为表面粗糙，凸凹不平，具有孔洞和颗粒。通过对比刺激前后胰岛细胞表面超微结构的四个参数——均方根粗糙度、平均粗糙度、平均高度、中间高度可知，受到列格吡嗪刺激后，细胞表面颗粒更加密集，因为列格吡嗪能够刺激体外培养的胰岛，使其胰岛素分泌显著增加，因此推测这些颗粒与胰岛细胞外分泌结构有关。 (二)采用MTT法测定了5-Fu／壳聚糖微球对两种肿瘤细胞的生长抑制率，比较了浓度为1.5μg／ml的5-Fu和5-Fu／壳聚糖微球对两种肿瘤细胞在用药处理24h，48h，72h后的杀伤效果。结果发现5-Fu／壳聚糖微球对两种肿瘤细胞的杀伤作用比5-Fu更强。同时，实验还采用原子力显微镜对5-Fu／壳聚糖微球及5-Fu作用后的肿瘤细胞进行成像，发现了肿瘤细胞在被药物诱导凋亡后出现的一系列形貌学变化：如细胞塌陷、皱缩，出现凋亡小体等凋亡特征，从而有助于更深入了解纳米药物对肿瘤细胞的作用机制，并使AFM展成为一种观察细胞凋亡，评估抗肿瘤药物疗效的工具。 (三)采用MTT法和原子力显微镜技术(AFM)测定了酸性生长因子(aFGF)对NIH／3T3细胞和COS-7细胞的增殖活性及个体细胞形态的影响。实验结果表明对于不同种类的细胞，aFGF对其影响不同。对于表面有aFGF受体的细胞——NIH／3T3细胞，MTT法结果表明在较低的浓度范围内，随着aFGF浓度的增加，OD值增加迅速，当浓度为2.5ng／ml时，OD值达到最大，但当浓度继续增加时，OD值反而减小。对于个体细胞而言，AFM图像结果表明当aFGF浓度较低时，相对于空白组，NIH／3T3细胞表面变得比较光滑平坦，细胞出现丰富的丝状伪足，但如浓度过高，其丝状伪足的伸展反而没有浓度较低时的状态好。MTT法及AFM图像结果证明，对于细胞表面没有aFGF受体的COS-7细胞，是否加入aFGF，以及加入aFGF的浓度对细胞都没有显著影响。

全文目录

摘要  6-7
Abstracts  7-8
第一章前言  8-22
  1.原子力显微镜介绍  8-12
  2.原子力显微在细胞生物学中的应用  12-16
    2.1 细胞固定方法讨论  13-14
    2.2 细胞成像  14
    2.3 力的检测  14-15
    2.4 细胞操纵  15-16
    2.5 联用技术  16
  3.展望  16-17
  参考文献  17-22
第二章格列吡嗪刺激体外培养胰岛细胞的AFM观察  22-31
  1.引言  22-24
  2.实验材料与方法  24-25
    2.1 试剂、材料及仪器  24
    2.2 列格吡嗪工作液的准备  24
    2.3 胰岛培养  24-25
    2.4 样品制备  25
    2.5 原子力显微镜扫描  25
  3.结果与讨论  25-29
  4.小结  29-30
  参考文献  30-31
第三章 5-氟尿嘧啶/壳聚糖纳米微球对肿瘤细胞杀伤作用的检测  31-50
  1.引言  31-34
    1.1 5-氟尿嘧啶类药物的研究进展  31-32
    1.2 壳聚糖纳米药物的研究进展  32-34
    1.3 细胞调亡  34
  2.试验材料与仪器  34-35
    2.1 细胞株与试剂  34-35
    2.2 实验仪器  35
  3.试验方法  35-36
    3.1 5-Fu/壳聚糖微球的制备  35
    3.2 MTT法测定5-Fu及5-Fu/Cs微球对肿瘤细胞的杀伤率  35-36
    3.3 AFM探测5-Fu及5-Fu/Cs微球对肿瘤细胞的杀伤作用  36
  4.试验结果与讨论  36-46
    4.1 5-Fu及5-Fu/Cs微球对肿瘤细胞的杀伤率  36-37
    4.2 人肝肿瘤细胞BEL7402调亡的AFM图  37-40
    4.3 人肺肿瘤细胞GLC-82调亡的AFM图  40-42
    4.4 人肝肿瘤细胞BEL7402表面超微结构直方图比较  42-44
    4.5 人肺肿瘤细胞GLC-82表面超微结构直方图比较  44-45
    4.6 讨论  45-46
  5.小结  46-48
  参考文献  48-50
第四章 aFGF对细胞增殖活性及形态的影响  50-61
  1.引言  50-51
  2.试验材料与仪器  51-52
    2.1 细胞株与试剂  51
    2.2 实验仪器  51-52
  3.试验方法  52
    3.1 MTT法测定aFGF促细胞增殖的活性  52
    3.2 AFM观测成像  52
  4.试验结果与讨论  52-59
    4.1 MTT测定aFGF对NIH/3T3细胞增殖活性的影响  53-54
    4.2 MTT测定aFGF对COS-7细胞增殖活性的影响  54-55
    4.3 aFGF促NIH/3T3细胞的AFM成像  55-57
    4.4 aFGF促COS-7细胞的AFM成像  57-59
  5.小结  59
  参考文献  59-61
攻读硕士期间发表论文情况  61
攻读硕士期间论文获奖情况  61
攻读硕士期间应邀参加国际国内学术会议情况  61-62
致谢  62

药物作用后细胞表面超微结构的AFM观察

内容摘要

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