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山西吕梁市幽门螺杆菌cagPAI分布及HSP60表达的研究

作　者: 高艳萍
导　师: 郝素珍
学　校: 山西医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 幽门螺杆菌 CagPAI HSP60
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

背景与目的目前认为H.pylori感染者临床表现的差异除与宿主的易感染性及环境因素、生活方式等有关外,更重要的是与H.pylori菌株的毒力差异有关。有文献报道,CagA与H.pylori的致病密切相关。而在最近的报道中,发现CagA表达阳性的H.pylori菌株中含有一个约40kb特殊基因的DNA片断,该片断只出现于致病相关菌株,基因呈高密度分布,具有细菌致病岛的典型特征,因此称其为H.pylori的Cag致病岛(cagPAI),视为H.pylori感染的又一个新的致病因素。现已清楚H.pylori中完整的CagPAI的结构,即其中各个基因的分布情况,但是否在致病的H.pylori中一定存在完整的CagPAI,CagPAI在相关性H.pylori胃部疾病中的作用等尚未完全清楚。为探讨山西吕梁市H.pylori的感染及临床分离率,本地区CagPAI中cagA、cagM、cagT、ORF13、ORF10各基因的存在情况以及在H.pylori相关胃部疾病中的作用,以更多地了解CagPAI在H.pylori致病机制中的作用,我们提出了这一课题。热休克蛋白(Heat Shcok Proteins,HSPs)是一类进化上高度保守,广泛存在于原核与真核细胞内,在细胞正常生命活动中起重要作用,应激状态下表达增多的一类蛋白。目前,有很多资料表明H.pylori感染与flSP70的表达有关,并在H.pylori致病中起重要作用。近来,有人发现,随着H.pylori感染程度的加重,HSP60的表达也明显升高。为进一步探讨H.pylori感染与HSP60表达的相关性,我们设计了对HSP60表达的研究,旨在为临床判定H.pylori感染程度及疗效提供一定的依据。实验方法胃镜直视下,用灭菌活检钳取306例有上消化道症状,就诊前两周内未服用抗生素、粘膜保护剂及质子泵抑制剂等药物的患者的胃粘膜病变组织两块。各型胃部疾病的病理诊断结果由山西汾阳医院病理科提供。用细菌的分离培养、革兰染色形态检查、快速尿素酶试验、过氧化氢酶试验及氧化酶试验确定H.pylori感染。用PCR对cagA、cagM、cagT、ORF13及ORF10基因进行检测,并对cagA进行序列测定。标本经石蜡包埋、切片,用免疫组化技术对HSP60的表达进行定性及半定量测定。结果①本试验共分离培养得到H.pylori临床菌株148株,其中来自慢性胃炎38株,消化性溃疡36株,萎缩性胃炎48株,胃癌26株。148株H.pylori临床分离株中cagA阳性菌株140株,阳性率为94.59%;②cagA基因的测序结果与NCBI上登录的cagA标准菌株(NCTC11637)基因对比发现,本地区菌株与标准菌株的核苷酸同源性为35.26%,而本地区菌株间核苷酸的同源性为95.35%;③来自慢性胃炎的38株H.pylori中,cagA阳性率为92.10%,cagM:92.10%,cagT:97.29%,ORF13:92.10%,ORF10:89.47%。来自消化性溃疡的36株H.pylori中,cagA阳性率为94.44%,cagM:100.0%,cagT:97.22%,ORF13:94.44%ORF10:91.66%。来自萎缩性胃炎的48株H.pylori中,cagA阳性率为95.83%,cagM:97.91%,cagT:91.66%,ORF13:95.83%,ORF10:93.75%。来自胃癌的26株H.pylori中,cagA阳性率为96.15%,cagM:100.00%,cagT:92.00%,ORF13:100.0%,ORF10:96.00%。H.pylori感染的胃部疾病中,各基因的存在无显著性差异(P＞0.05);④H.pylori感染的胃部疾病中,72.97%(108/148)的菌株可能有完整的CagPAI;27.0%(40/148)菌株部分缺失CagPAI。CagPAI完整性在各胃及十二指肠疾病中的分布无显著性差异(P＞0.05)。部分缺失CagPAI在各胃及十二指肠疾病中的分布无显著性差异(P＞0.05)。H.pylori阳性及阴性菌株中HSP60表达的检测结果:HSP60的表达主要见于胃黏膜固有层的炎性细胞的细胞浆中;H.pylori阳性菌株HSP60表达(54.72%)显著高于H.pylori阴性菌株(26.31%)(P＜0.005);HSP60在浅表性胃炎、消化性溃疡、萎缩性胃炎及胃癌中的表达阳性率分别为31.57%、41.66%、70.83%、76.92%,随着临床疾病的严重程度有增高趋势,比较有显著性差异(P＜0.005);各种临床疾病的过表达率分别为15.78%、22.22%、47.91%及65.38%;萎缩性胃炎及胃癌中HSP60的过表达与浅表性胃炎及消化性溃疡中HSP60的过表达有显著性差异(P＜0.05)。结论①本地区临床胃疾患病人中H.pylori的检出率为48.36%;②cagA的阳性率为94.59%。cagA基因与标准菌株cagA序列相比对有一定的差异,cagA基因的序列特性有待进一步研究;③cagA、cagM、cagT、ORF13、ORF10五个基因在各个类型的胃部疾病中的检出率都比较高,提示cagPAI的存在与H.pylori感染有关,但是与临床感染疾病类型无关;cagA可以作为cagPAI存在的指标,但不能用单个基因预测H.pylori感染的胃及十二指肠疾病的类型。本实验结果显示HSP60的高表达与H.pylori感染及其临床感染的严重程度相关;HSP60的过度表达可能发生在胃癌发生发展的过程中,推断可以通过对HSP60表达的检测,对H.pylori感染的现状及趋势进行预测,更多的关系有待进一步研究。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
正文  9-43
  第一章 H.pylori临床分离株CagPAI的研究  9-28
    前言  9-12
    材料与方法  12-17
    实验结果  17-21
    讨论  21-24
    结论  24-25
    参考文献  25-28
  第二章 H.pylori感染与胃粘膜病变中HSP60表达的相关性研究  28-39
    前言  28-30
    材料与方法  30-32
    实验结果  32-34
    讨论  34-36
    结论  36-37
    参考文献  37-39
  附图  39-43
综述  43-53
  正文  43-49
  参考文献  49-53
个人简介  53-54
致谢  54

山西吕梁市幽门螺杆菌cagPAI分布及HSP60表达的研究

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