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流式细胞术测定多发性骨髓瘤细胞表面标记的研究

作　者: 黄春妮
导　师: 李山
学　校: 广西医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 多发性骨髓瘤胞膜抗原流式细胞术 CD
分类号: R733.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

背景多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是以骨髓内浆细胞恶性增生,分泌单克隆免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)或轻链(Light chain,L),并伴有正常免疫球蛋白减少以及广泛溶骨病变和(或)骨质疏松为特征的肿瘤。它常见于中、老年人,随着年龄增长,其发病率也明显升高。既往曾误认为MM是一种少见病,近年来,随着人口的老龄化和人们对此病认识及诊断水平的提高,MM病例数显著增加。目前在我国无MM的流行病学资料,但随着我国人口老龄化的发展,MM的发病率也有逐年增高的趋势,它必将对我国人口的健康构成越来越严重的威胁。骨髓细胞形态学检查是确诊MM的重要依据之一,但是MM细胞有灶性分布的特征,部分疑似病例的骨髓标本中,浆细胞比例难以达到形态学诊断标准,且部分骨髓瘤细胞与正常浆细胞形态相似,很难区别。近年来随着单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb)的应用及流式细胞术(Flow cytometry,FCM)的快速发展,流式细胞术-免疫学方法已经成为白血病诊断和分型的重要依据,它能快速、准确、客观的反映白血病细胞的生物学特性,提高了白血病的诊断水平,并能指导治疗和提示预后。但是,利用流式细胞术对MM进行免疫学分型还处于研究、探索阶段。国内对MM免疫表型研究的报道较少,且多以白血病免疫分型经典方法CD45/SSC(Side scatter,侧向角散射)设门,该设门方法易受浆细胞(Plasma cells,PCs)CD45表达变异度大和有核红细胞的影响。因此,有必要研究一种更为可靠的流式细胞学的设门方法。目的本试验通过CD38/SSC设门的FCM方法,检测MM胞膜上的相关抗原分子,探讨改善MM检测的方法,为临床提供更加准确的早期诊断、治疗指导及预后判断的依据。方法研究经骨髓细胞学、临床表现、影像学、血清学等指标确诊的MM患者37例,另取20例浆细胞反应性增多症(Reactive plasmacytosis,RP)患者为对照组,分别抽取骨髓液,用三色荧光流式细胞术检测骨髓瘤细胞和正常浆细胞表面的免疫表型。主要单克隆抗体有:CD19、CD56、CD13、CD138、HLA-DR、CD33、CD64、CD34、CD8、CD3、CD5、CD10、CD1a、CD14、CD40、CD4、CD25、CD20、CD7、CD45、CD49e。所得数据经SPSS13.0统计软件处理。结果1、所有标本经流式细胞术CD38/SSC设门后可见到一群CD38阳性细胞,比例为0.5%～80.0%。2、多数MM表型为CD38~+CD19~-CD56~+(89.2%),CD56的表达在初治或未缓解组明显比缓解组高,但发生髓外侵犯时反而明显降低。3、骨髓瘤细胞CD40、CD138的表达明显高于对照组正常浆细胞的表达。4、幼稚浆细胞/浆细胞比值与CD45~+CD49e~+细胞比例呈负相关,根据CD45~+CD49e~+细胞的比例可大致判断骨髓内浆细胞的分化程度。结论1、利用CD38/SSC设门方法的流式细胞术对MM进行免疫分型,根据细胞表面抗原的异质性,可鉴别良、恶性浆细胞,为判断预后及靶向治疗提供依据。2、以细胞表型为CD38~+CD19~-CD56~+者作为FCM法检出MM阳性,有很高的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,而且检测所需时间短,临床实用性强,有望作为MM的诊断方法和早期筛选方法,在具备流式细胞仪的大医院推广使用。

流式细胞术测定多发性骨髓瘤细胞表面标记的研究

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