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金标SPA快速检测IgG含量的方法建立

作　者: 王继雯
导　师: 李宏基；杨国宇
学　校: 河南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 金标SPA 免疫球蛋白IgG 胶体金条件优化评价应用
分类号: Q503
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

为了建立快速检测血清中IgG含量的金标SPA法,本论文通过金标SPA的制备、金标SPA法的条件优化、评价和应用试验,初步建立了一个快速检测猪血清IgG含量的方法。金标SPA的制备。本试验用直径为10nm的胶体金对SPA(金黄色葡萄球菌A蛋白)进行标记和超速离心纯化,制得金标SPA即金探针,用两点法检测金标SPA的生物活性和稳定性,结果发现:金标SPA的活性较好,能稳定地保存三个月左右。金标SPA法的条件优化。本试验分别从金探针的浓度、溶液pH值、温度和作用时间四个因素进行探讨,结果发现在常温(15—20℃)且温度变化不大(±1℃)、pH7.4、金标SPA最佳稀释比为1∶4的条件下作用40min左右为金标SPA法的最佳作用条件;测定猪血清中IgG含量时,血清最佳稀释倍数为1∶1000。方法的评价和应用。本试验以检测猪血清中IgG为例,通过线性范围试验、批内和批间重复性试验、回收试验、方法对比试验对金标SPA法进行评价,并在成年猪、不同日龄仔猪的血清IgG检测方面进行应用,进一步验证了该法的可行性和实用性。结果表明:该方法灵敏度高,检测范围2.16～116.67μg/mL;回收率为98.18%;批内和批间变异系数分别为4.54%,5.88%;通过与夹心ELASA方法进行对比,发现两种方法的测定值高度相关(r=0.9945),但金标SPA法操作简便、快速、一步完成、不需多次洗涤、易于自动化操作。因此,具有很高临床应用价值。

全文目录

致谢  4-7
摘要  7-8
1 文献综述  8-19
  1.1 免疫球蛋白IgG的结构和功能  8-9
    1.1.1 免疫球蛋白的结构  8
    1.1.2 免疫球蛋白IgG的生物学特性与功能  8-9
  1.2 免疫球蛋白IgG检测方法的研究进展  9-12
    1.2.1 单向免疫扩散法  9-10
    1.2.2 高效液相色谱法  10
    1.2.3 酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)  10-11
    1.2.4 其它检测方法  11-12
  1.3 胶体金和胶体金标记技术的应用及研究进展  12-19
    1.3.1 胶体金的结构  12
    1.3.2 胶体金的性质  12
    1.3.3 胶体金的制备  12-13
    1.3.4 免疫金标记技术的基本原理  13-14
    1.3.5 胶体金在免疫学上的应用及研究进展  14-19
2 引言  19-20
3 材料与方法  20-26
  3.1 金标SPA的制备  20-21
    3.1.1 仪器与试剂  20
    3.1.2 试验方法  20-21
  3.2 金标法的条件优化  21-23
    3.2.1 仪器与试剂  21-22
    3.2.2 试验方法  22-23
  3.3 方法评价试验及应用  23-26
    3.3.1 仪器与试剂  23
    3.3.2 试验方法  23-26
4 结果分析  26-34
  4.1 金标SPA的制备  26
  4.2 金标法的条件优化  26-29
    4.2.1 金探针工作浓度  26-27
    4.2.2 pH值  27
    4.2.3 温度和作用时间  27-28
    4.2.4 血清稀释倍数  28-29
  4.3 方法评价试验及应用  29-34
    4.3.2 特异性试验  30
    4.3.3 样品回收试验  30-31
    4.3.4 重复性试验  31-32
    4.3.5 方法对比试验  32
    4.3.6 初步应用  32-34
5 讨论  34-38
  5.1 金标SPA的制备  34-35
  5.2 方法条件的优化  35-36
    5.2.1 金探针工作浓度  35
    5.2.2 pH值  35-36
    5.2.3 温度和作用时间  36
    5.2.4 血清稀释倍数  36
  5.3 方法评价试验及初步应用  36-38
6 结论  38-39
参考文献  39-43
英文摘要  43-44

金标SPA快速检测IgG含量的方法建立

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