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小鼠抗蛋清提取物单克隆抗体的制备与初步鉴定

作　者: 许静
导　师: 傅颖媛
学　校: 南昌大学
专　业: 免疫学
关键词: 蛋清提取物单克隆抗体特性鉴定 ELISA Western blot
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的:制备和初步鉴定小鼠抗鸡蛋清提取物单克隆抗体。方法:以纯化后的蛋清提取物为免疫原,经背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。采用棋盘滴定法确定抗原的最佳包被浓度,并通过间接ELISA法检测免疫小鼠血清效价,选取血清效价高的小鼠用于单克隆抗体的制备。无菌分离免疫小鼠脾脏,制成单个细胞悬液,与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选10株阳性融合孔中的融合细胞,采用有限稀释法进行克隆与亚克隆培养;间接ELISA法筛选可特异性分泌抗蛋清提取物单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)的杂交瘤细胞;增量培养法制备单克隆抗体; Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定McAb的Ig类与亚类;间接ELISA法检测杂交瘤细胞冻融前后产生McAbs的效价;Western blot鉴定McAbs的特异性。结果:采用棋盘滴定法确定抗原的最佳包被浓度为100 ng?mL-1。经克隆及3～4轮亚克隆,8株克隆失去产生抗体的能力,最终获得2株可稳定分泌抗蛋清提取物McAb的杂交瘤细胞,分别命名为5E12和4F1;其分泌的McAb均为IgG1。Western blot分析表明,McAb 4F1可与转印至膜上的蛋白形成单一条带,所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为44KD。间接ELISA法检测两株细胞冻融前后所产生的McAb5E12、4F1的效价分别为1:5000、1:300。结论:成功地制备了两株抗蛋清提取物McAb 5E12和4F1,为下一步制备、纯化特异性抗蛋清提取物单克隆抗体提供了杂交瘤细胞,并为进一步建立快速检测、提取、纯化及鉴定食物中蛋清变应原的方法,奠定了有效的实验基础。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-7
英文缩写及中英文对照表  7-9
前言  9-12
材料与方法  12-22
  2.1 材料  12-14
  2.2 方法  14-22
结果  22-31
  3.1 抗原最佳包被浓度的选择  22-23
  3.2 ELISA 检测小鼠血清效价  23-24
  3.3 测定细胞融合率及融合细胞的抗体阳性率  24-26
  3.4 杂交瘤细胞的制备  26-27
  3.5 间接 ELISA 法检测单克隆抗体效价  27-28
  3.6 Ig 类及亚类的鉴定  28-30
  3.7 Western blot 检测单克隆抗体特异性  30-31
讨论  31-36
结论  36-37
致谢  37-38
参考文献  38-42
综述  42-49
攻读学位期间的研究成果  49

小鼠抗蛋清提取物单克隆抗体的制备与初步鉴定

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