学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

抗香蕉枯萎病放线菌的筛选及菌株Da03047、Da04010的分类鉴定

作　者: 张桂兴
导　师: 鲍时翔
学　校: 华南热带农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 古巴尖孢镰刀菌放线菌筛选鉴定发酵活性物质
分类号: S436.68
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 303次
引　用: 3次
阅　读: 论文下载

内容摘要

香蕉镰刀菌枯萎病,是由古巴尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f. sp. cubense,FOC)侵染引起的一种毁灭性病害,严重危害着世界香蕉的生产。然而对香蕉枯萎病的防治目前尚无理想的化学药剂和抗病品种,一些栽培管理措施也只能起到局部的控制作用,因此加强该病的防治迫在眉睫。本论文从海南东寨港红树林、三江红树林、尖峰岭原始森林等国家自然保护区以及金江、黄流等地发病蕉园采集样品,用高氏一号培养基作为放线菌分离培养基,以镰刀菌4号生理小种作为指示菌,对所分离的放线菌进行活性筛选。初筛获得28株具有抗镰刀菌的活性菌株,经复筛得到2株活性强且遗传稳定的菌株Da03047和Da04010。经形态与生理生化特征、16S rDNA序列测定及其系统发育分析的研究,将菌株Da03047鉴定为灰肉色链霉菌Streptomyces griseocarneus;菌株Da04010鉴定为兰灰链霉菌Streptomyces cyaneogriseus。通过发酵工艺优化,确定菌株Da03047最佳培养基成份及发酵条件为:葡萄糖1%,蔗糖0.5%,玉米粉0.5%,大豆粉0.5%,K2HP04 0.05%,初始pH值7.0,种龄48h,接种量10%,200r/min培养5d,培养温度28℃,250mL三角瓶装液量75mL。确定菌株Da04010的最佳培养基配方及发酵条件为:葡萄糖2.5%,甘油3%,玉米粉0.75%,大豆粉0.5%,K2HP04 0.05%,初始pH值7.0,种龄48h,接种量10%,200r/min发酵5d,培养温度28℃,250mL三角瓶装液量100mL。菌株Da03047发酵液抑菌圈直径从优化前的16.0mm提高到19.0mm,Da04010发酵液抑菌圈直径从17.0mm提高到20.0mm。对菌株Da03047和Da04010所产抗菌活性物质的稳定性做了初步研究,结果表明,菌株Da03047所产活性物质具有较好的热、光稳定性,当发酵液pH4.0~8.0时,抑菌活性变化不大,但在pH>8.0时不稳定。而Da04010所产的抗菌活性物质则对热、光敏感,在pH>8.0时抑菌活性不稳定,但在pH1.0~8.0时,抑菌活性变化不大。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
1 前言  8-23
  1.1 香蕉镰刀菌枯萎病的研究现状  8-13
    1.1.1 香蕉镰刀菌枯萎病的病原、发生及危害  8-9
    1.1.2 香蕉镰刀菌枯萎病的致病机制  9-11
    1.1.3 香蕉镰刀菌枯萎病的防治  11-13
      1.1.3.1 栽培管理  11
      1.1.3.2 培育抗病品种  11
      1.1.3.3 化学防治  11-12
      1.1.3.4 生物防治  12-13
  1.2 微生物农药的研究及应用现状  13-21
    1.2.1 微生物农药的特点  13
    1.2.2 微生物农药的分类  13-20
      1.2.2.1 活体微生物农药  14-16
      1.2.2.2 农用抗生素  16-20
    1.2.3 微生物农药的应用前景  20-21
  1.3 本论文的目的与意义  21-23
2 材料与方法  23-35
  2.1 试验材料  23-26
    2.1.1 试剂  23
    2.1.2 试剂浓度标准  23
    2.1.3 仪器  23-24
    2.1.4 供试菌株  24
    2.1.5 培养基  24-26
      2.1.5.1 放线菌分离培养基  24
      2.1.5.2 放线菌形态特征鉴定培养基  24
      2.1.5.3 放线菌生理生化特征鉴定培养基  24-25
      2.1.5.4 发酵培养基  25
      2.1.5.5 活性检测培养基  25
      2.1.5.6 其它培养基  25-26
  2.2 实验方法  26-35
    2.2.1 样品的采集与处理  26
      2.2.1.1 样品来源  26
      2.2.1.2 样品处理  26
    2.2.2 放线菌的分离与筛选  26-27
      2.2.2.1 抗镰刀菌活性菌株的初筛  26-27
      2.2.2.2 抗镰刀菌活性菌株的复筛  27
      2.2.2.3 活性菌株的遗传稳定性考察  27
      2.2.2.4 活性菌株保存  27
    2.2.3 放线菌的鉴定  27-31
      2.2.3.1 形态学特征  27
      2.2.3.2 生理生化特征  27-28
      2.2.3.3 165 rDNA 序列测定  28-31
      2.2.3.4 系统发育树分析  31
    2.2.4 菌株Da03047 和Da04010 的发酵优化  31-33
      2.2.4.1 培养条件  31
      2.2.4.2 测定方法  31
      2.2.4.3 培养基成份对Da03047 和Da04010 活性的影响  31-33
      2.2.4.4 培养条件对菌株Da03047 和Da04010 活性的影响  33
    2.2.5 活性物质的稳定性研究  33-35
      2.2.5.1 热稳定性  33
      2.2.5.2 酸碱稳定性  33-34
      2.2.5.3 光稳定性  34-35
3 结果与分析  35-54
  3.1 抗镰刀菌活性放线菌的分离与筛选  35-36
    3.1.1 抗镰刀菌活性菌株的初筛  35
    3.1.2 抗镰刀菌活性菌株的复筛  35
    3.1.3 抗镰刀菌活性菌株的遗传稳定性考察  35-36
    3.1.4 活性菌株发酵液的抗菌谱测定  36
  3.2 菌株Da03047 和Da04010 的分类鉴定  36-42
    3.2.1 形态学特征  36-38
    3.2.2 生理生化特征  38-39
    3.2.3 对抗生素的敏感性试验  39-40
    3.2.4 165 rDNA 序列测定  40
    3.2.5 系统发育分析  40-42
    3.2.6 菌株Da03047 和Da04010 的鉴定结果  42
  3.3 菌株Da03047 和Da04010 发酵工艺的优化  42-52
    3.3.1 培养基组成对菌株Da03047 和Da04010 活性物质的影响  42-47
      3.3.1.1 碳源对菌株活性的影响  42-43
      3.3.1.2 碳源浓度对菌株活性的影响  43-44
      3.3.1.3 氮源对菌株活性的影响  44
      3.3.1.4 氮源浓度对菌株活性的影响  44-45
      3.3.1.5 碳、氮源正交优化实验  45-47
      3.3.1.6 K_2HPO_4 对活性的影响  47
    3.3.2 培养条件对菌株Da03047 和Da04010 活性物质的影响  47-52
      3.3.2.1 温度对菌株活性的影响  47-48
      3.3.2.2 初始pH 对菌株活性的影响  48
      3.3.2.3 接种量对菌株活性的影响  48-49
      3.3.2.4 装液量对菌株活性的影响  49-50
      3.3.2.5 摇床转速对菌株活性的影响  50
      3.3.2.6 发酵时间对菌株活性的影响  50-51
      3.3.2.7 种龄对菌株活性的影响  51-52
  3.4 活性物质的稳定性研究  52-54
    3.4.1 热稳定性  52
    3.4.2 光稳定性  52-53
    3.4.3 酸碱稳定性  53-54
4 讨论  54-58
  4.1 放线菌的生态分布  54
  4.2 镰刀菌拮抗放线菌的分离和筛选  54-56
  4.3 菌株Da03047 和Da04010 的分类鉴定  56-58
5 结论  58-59
参考文献  59-63
缩略词  63-64
附录  64-66
致谢  66

抗香蕉枯萎病放线菌的筛选及菌株Da03047、Da04010的分类鉴定

内容摘要

全文目录

相似论文