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甲钴胺、叶酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

作　者: 金永民
导　师: 姜美子
学　校: 延边大学
专　业: 眼科学
关键词: 甲钴胺叶酸大鼠脑缺血再灌注损伤
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：脑缺血可引起神经细胞坏死、凋亡及神经纤维髓鞘脱失，导致脑功能障碍。研究发现高同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)血症是脑卒中的一个独立危险因素。脑梗死患者血浆hcy水平升高，且与叶酸、甲钴胺水平呈负相关。甲钴胺和叶酸可能降低血中Hcy水平，增加ERK活性，保护脑组织。另外，大量实验显示甲钴胺可促进中枢神经系统髓鞘损伤的恢复，但其机制尚有争议。本研究制备脑组织再灌注模型，通过检测甲钴胺和叶酸治疗前后不同时期脑梗死面积、凋亡细胞数、血浆中Hcy含量、脑组织中ERK的活性，进一步探讨甲钴胺、叶酸对脑缺血损伤的保护作用。方法：采用大脑中动脉线栓法建立预缺血大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，SD大鼠50只，体重200～300g，随机分为假手术组、缺血再灌注组、甲钴胺预处理缺血再灌注组、叶酸预处理缺血再灌注组、甲钴胺联合叶酸预处理缺血再灌注组。动物模型制备：采用线栓法，大鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，用特制的尼龙线阻断大脑中动脉血流，3h后抽出栓线，形成再灌注，再灌注3、6、24、72h后处死。假手术组仅暴露颈总动脉及分叉处，不插线阻断大脑中动脉。各组动物术中均用加热板使其肛温维持在37℃左右，术后单笼饲养。预处理组于动物清醒后立即给予甲钴胺、叶酸、甲钴胺+叶酸灌胃治疗，预先4周，每天2次灌胃。本实验①测定梗死面积：各组大鼠分别于再灌注3、6、24、72h后处死。届时断头取脑，立即做冠状切片，放入2％TTC磷酸盐缓冲液中染色，各个脑片摄像，用LUZEX-F图像分析软件计算出梗死面积。②检测凋亡细胞数：玻片脱蜡、乙醇水化，滴加TUNEL染色缓冲液，DAB显色后，在光镜400倍下选择6个具有代表性的视野，计数1mm~2阳性细胞数。③不同时间点测定血浆中Hcy含量④免疫印迹法测定ERK的活性：取出全脑，分离出背侧海马约100mg，匀浆后超声粉碎，离心，转膜，用过氧化物酶标记的二抗孵育，X光片上的显色条带进行光密度扫描半定量分析。结果：叶酸、甲钴胺预处理组的脑梗死面积、细胞凋亡数、Hcy含量均比缺血组减少(P＜0.05)，叶酸、甲钴胺预处理组的脑组织ERK的表达增加(P＜0.05)，联合应用组差异更显著(P＜0.01)。结论：甲钴胺和叶酸明显减轻缺血性损伤，具有脑保护作用，联合应用作用更佳。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章绪论  8-9
第二章材料与方法  9-12
  2.1 材料  9
  2.2 实验分组  9
  2.3 方法  9-12
    2.3.1 大鼠脑缺血模型的制作  9-10
    2.3.2 脑梗死面积测定  10
    2.3.3 调亡细胞数测定  10
    2.3.4 血浆中Hcy含量检测  10-11
    2.3.5 蛋白免疫印迹法(Immunoblotting)  11
    2.3.6 统计学分析  11-12
第三章结果  12-16
  3.1 脑梗死面积测定  12-13
  3.2 调亡细胞数测定  13-14
  3.3 血浆中Hcy含量检测  14-15
  3.4 ERK的活性  15-16
第四章讨论  16-20
第五章结论  20-21
致谢  21-22
参考文献  22-28
文献综述  28-32
参考文献  32-36
附录A 攻读硕士研究生期间发表的论文  36-37
附录 B (附表及附图)  37-39

甲钴胺、叶酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

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