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仔猪抗菌肽PR-39与Protegrin-1基因表达调控研究

作　者: 周灿
导　师: 贺建华
学　校: 湖南农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 仔猪抗菌肽 PR-39 Protegrin-1 RT-PCR 复合多糖基因表达
分类号: S816.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

为研究抗菌肽基因 PR-39及Protegrin-1 mRNA在不同日龄仔猪胸腺、脾脏、肠系膜淋巴结及股骨骨髓中的表达规律，探讨断奶和日粮中添加复合多糖对其表达的影响，根据已报道的猪抗菌肽PR-39、Protegrin-1和内标18s rRNA基因序列，设计抗菌肽和18s rRNA的引物，构建一优化的半定量RT-PCR方法用于仔猪抗菌肽基因mRNA表达量的测定，为今后抗生素替代产品环保型饲料添加剂的开发与应用提供理论依据和指导。试验1：选用胎次基本相同，出生体重相近的0、3、14、23(未断奶)、23(断奶2d)、28(未断奶)、28(断奶7d)日龄健康杜长大公仔猪各4头，屠宰后无菌条件下分别取出胸腺、脾脏、肠系膜淋巴结及股骨骨髓，用RT-PCR法检测其中PR-39及Protegrin-1基因表达的差异以及断奶对其表达的影响。研究结果表明，PR-39及Protegrin-1在骨髓中表达最丰富(P＜0.05)，胸腺其次，脾脏和肠系膜淋巴结中表达最少。各免疫组织中PR-39 mRNA的表达随日龄变化的规律一致，0～3日龄PR-39 mRNA的表达呈上升趋势，3～14日龄呈下降趋势，14～28日龄表达又有所回升。骨髓和胸腺中Protegrin-1 mRNA的表达量随日龄的增加持续上升，但各日龄间的表达差异均不显著。脾脏和肠系膜淋巴结中Protegrin-1 mRNA的表达量随日龄变化的规律与PR-39一致。另外，各免疫组织中PR-39及Protegrin-1在23日龄(断奶2d)的表达较23日龄(未断奶)时的表达有下降趋势，在骨髓中分别下降了16.04％(P＜0.05)和20.11％(P＜0.05)，在胸腺、脾脏、肠系膜淋巴结中差异不显著(P＞0.05)；各免疫组织中PR-39及Protegrin-1基因在28日龄(断奶7d)的表达较28日龄(未断奶)时的表达相比，也呈下降趋势，但差异不显著。结果揭示，PR-39及Protegrin-1mRNA的表达存在组织和日龄差异性，并且断奶对其基因的表达产生显著影响。试验2：选用160头28日龄杜长大断奶仔猪，按体重相近原则随机分成5个处理组，每组设4个重复，每个重复8头猪(公母各半)，分别饲喂基础饲粮(DE13.50MJ／kg，CP18.60％)、添加0.027％抗生素饲粮、添加0.05％复合多糖(牛膝、玄参、杜仲)饲粮、添加0.1％复合多糖饲粮，添加0.15％复合多糖饲粮。预饲期7天，正饲期为28天。饲养实验结束时，每组随机取4头屠宰，无菌条件下取左腿股骨骨髓，检测其中PR-39及Protegrin-1 mRNA表达量。研究结果表明，复合多糖对断奶仔猪体内抗菌肽PR-39及Protegrin-1 mRNA的表达有显著影响。基础日粮中添加不同剂量的复合多糖均不同程度地促进了PR-09及Protegrin-1 mRNA的表达，以0.10％组效果最好，PR-39 mRNA的表达分别超过对照组和抗生素组50％和51.5％(P＜0.05)，Protegrin-1 mRNA的表达分别超过对照组和抗生素组36.36％(P＜0.05)和27.90％(P＞0.05)，但各多糖处理组间差异不显著。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
英文缩略词  10-11
第一章绪论  11-22
  1.1 抗菌肽 PR-39和Protegrin-1的研究进展  11-17
    1.1.1 PR-39和Protegrin-1的结构特点  11-13
    1.1.2 PR-39和Protegrin-1的抗菌作用及机理  13-15
    1.1.3 PR-39和Protegrin-1的基因表达与调控  15-17
  1.2 多糖在动物生产上的应用  17-20
    1.2.1 提高生产性能  18
    1.2.2 促进免疫机能  18-19
    1.2.3 防治疾病作用  19-20
  1.3 本研究的目的与意义  20-22
第二章抗菌肽PR-39与Protegrin-1基因在不同日龄仔猪各免疫组织中的表达差异  22-48
  2.1 材料  22-24
    2.1.1 试验动物  22
    2.1.2 主要仪器  22-23
    2.1.3 主要试剂及配制  23-24
  2.2 方法  24-27
    2.2.1 总RNA提取  24
    2.2.2 逆转录反应  24-25
    2.2.3 引物的选择和退火温度(Tm)的确定  25
    2.2.4 反应体系  25-26
    2.2.5 循环数的确定  26-27
    2.2.6 琼脂糖凝胶电泳  27
    2.2.7 半定量RT-PCR分析  27
    2.2.8 抗菌肽PR-39及Protegrin-1 PCR产物的验证  27
    2.2.9 数据处理  27
  2.3 结果与分析  27-44
    2.3.1 各免疫组织PR-39及Protegrin-1 PCR产物测序结果  27-32
    2.3.2 抗菌肽基因及内参基因表达循环数的确定  32-37
    2.3.3 不同免疫组织中抗菌肽基因mRNA表达差异  37-38
    2.3.4 不同日龄哺乳仔猪各免疫组织抗菌肽基因表达差异  38-41
    2.3.5 断奶对仔猪各免疫组织抗菌肽基因表达的影响  41-44
  2.4 讨论  44-48
第三章复合多糖对仔猪抗菌肽基因mRNA表达的影响  48-55
  3.1 材料与方法  48-50
    3.1.1 试验动物及分组  48-49
    3.1.2 试验日粮  49
    3.1.3 复合多糖的提取  49-50
    3.1.4 饲养管理  50
    3.1.5 样品采集  50
    3.1.6 总RNA的提取及RT-PCR(同2.2)  50
  3.2 结果与分析  50-52
    3.2.1 复合多糖对仔猪抗菌肽PR-39基因mRNA表达的影响  50-51
    3.2.2 复合多糖对仔猪抗菌肽Protegrin-1基因mRNA表达的影响  51-52
  3.3 讨论  52-55
结论  55-56
参考文献  56-66
致谢  66-67
作者简历  67

仔猪抗菌肽PR-39与Protegrin-1基因表达调控研究

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