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LegA基因启动子5’端系列缺失表达载体的构建及转化拟南芥

作　者: 刘晓丽
导　师: 郭建春
学　校: 华南热带农业大学
专　业: 作物遗传与育种
关键词: 种子特异性启动子表达载体拟南芥遗传转化
分类号: Q782
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

理想的转基因植物往往需要外源基因在特定部位和特定时间内高水平表达，产生人们期望的表型性状。启动子在决定基因表达方面起关键作用。本实验选择种子特异性启动子—LegA基因的启动子作为研究对像，构建了5’端系列缺失表达载体分别命名为：leg0029Ⅰ，leg0029Ⅲ，leg0179Ⅰ，leg0179Ⅲ。本实验为后面我们组系统研究马槟榔种子特异启动子的功能提供对照。本论文利用其中的三个表达载体leg0029Ⅰ，leg0029Ⅱ，leg0179Ⅲ进行了拟南芥的转化研究。拟南芥被称为植物界中的“果蝇”，长期以来人们一直把它作为传统遗传学和分子生物学研究的模式实验材料。近年来，发育遗传学更是把拟南芥作为了首要材料。为了与国际接轨，近年来国内也已开始引入了拟南芥作为实验材料。在我们实验室，由于气候，温度，湿度等原因，拟南芥的应用一直受到限制，拟南芥转基因植物一直没有成功。为了充分发挥这一模式植物的优点，掌握拟南芥的培养技术就显得非常重要。结合本地的实验条件和气候特点本实验着重在拟南芥的培养介质、播种、浇水、湿度、光照条件及转化的两种常用方法(真空抽滤法和DIP法)方面进行了探索，取得了一些突破性的结果。摸索出了适合本实验室的拟南芥培养条件，并以构建的表达载体为材料进行了拟南芥的转化探讨，通过抗生素抗性筛选已成功的获得了转基因拟南芥。本实验为本实验室进行模式植物拟南芥的应用提供了经验和借鉴。

全文目录

摘要  5-7
第一章引言及综述  7-32
  第一部分启动子部分  7-22
    第一节启动子的一般特点  7-9
    第二节启动子类型  9-22
      2.1 组成型启动子  9-11
        2.1.1 CaMV35S启动子  10-11
        2.1.2 Nos和Ocs启动子  11
        2.1.3 Actl启动子  11
      2.2 诱导型启动子  11-15
        2.2.1 光诱导启动子  12-13
        2.2.2 创伤诱导启动子  13
        2.2.3 化学物质诱导启动子  13-14
        2.2.4 温度诱导启动子  14-15
      2.3 组织特异性启动子  15-21
        2.3.1 花粉组织特异性启动子  17-18
        2.3.2 胚乳组织特异性启动子  18
        2.3.3 胚特异性启动子  18-19
        2.3.4 种子特异性启动子  19-21
      2.4 双向启动子  21-22
  第二部分拟南芥部分  22-32
    第一节拟南芥的生物学特性  22-24
    第二节拟南芥的研究历史  24-26
    第三节影响拟南芥生长的生物学因素  26-28
    第四节拟南芥的遗传转化方法  28-30
    第五节拟南芥的基因组学研究  30-32
第二章材料与方法  32-41
  2.1 材料  32-34
  2.2 方法  34-41
第三章结果与讨论  41-56
  第一节启动子表达载体的构建  41-48
    3.1 载体构建路线  41
    3.2 载体构建  41-48
      3.2.1 中间表达载体的构建及酶切鉴定  42-43
      3.2.2 表达载体构建  43-48
        3.2.2.1 表达载体Leg0029Ⅰ的构建  43-44
        3.2.2.2 表达载体Leg0029Ⅲ的构建  44-45
        3.2.2.3 表达载体Leg0179Ⅰ的构建  45-46
        3.2.2.4 表达载体Leg0029Ⅲ的构建  46-47
        3.2.2.5 表达载体的酶切鉴定图  47-48
  第二节拟南芥的种植及转化  48-56
    2.1 种植  48-52
      2.1.1 培养介质对比实验  48-51
      2.1.2 播种  51
      2.1.3 管理  51-52
    2.2 转化  52
    2.3 转化植株的筛选  52-55
      2.3.1 种子的消毒  52-53
      2.3.2 播种  53
      2.3.3 生长  53
      2.3.4 抗性植株的获得  53-55
    2.4 小结  55-56
参考文献  56-62

LegA基因启动子5’端系列缺失表达载体的构建及转化拟南芥

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