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染料荧光探针与蛋白质、核酸相互作用的研究

作　者: 吴霖
导　师: 俞英
学　校: 华南师范大学
专　业: 物理化学
关键词: 荧光分析法碱性品红牛血清白蛋白 DNA 偶氮氯膦(I) 荧光猝灭法铝试剂
分类号: O657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

本文提出以染料碱性品红和偶氮氯膦Ⅰ作为蛋白质的探针，碱性品红和铝试剂作为核酸探针。研究结果表明： 1 研究了以三苯甲烷类阳离子染料碱性品红(RL)与牛血清白蛋白(BSA)的结合模型，发现结合反应符合Pesavento提出的相分配模型，求得不同温度下RL与BSA相互作用的结合常数，依据热力学常数确定了RL与BSA之间的作用力类型为疏水作用力。以RL为荧光探针建立蛋白质的定量分析方法。在近中性范围内，碱性品红与蛋白质有较强的结合，该产物的荧光强度与蛋白质的量呈线性相关关系。线性响应范围为0.02～5.0μg／mL，最低检出限可达19.6μg／L，用于实际样品中蛋白质含量的测定，结果满意。 2 以三苯甲烷类阳离子染料碱性品红(RL)为荧光探针建立DNA的定量分析方法。在近中性范围内碱性品红与DNA有较强的结合，生成复合物的荧光强度与DNA的量成线性上升关系，线性响应范围为0.048～33.0μg／mL(r=0.9904)，检测限38.9μg／L。并用于样品中DNA含量的测定，得到满意的结果，并对作用机理进行了探讨，认为RL与DNA相互作用存在插入结合形式。 3 在pH9.25 Britton-Robinson(B-R)缓冲介质中，用荧光光度法研究了酸性染料偶氮氯膦Ⅰ(CP Ⅰ)与蛋白质的相互作用，牛血清白蛋白(BSA)对CP Ⅰ的荧光有猝灭现象，使CP Ⅰ最大荧光峰从578nm红移至610nm，通过对荧光猝灭机理进行了探讨，认为两者之间的猝灭是由于生成不发荧光的复合物，属于静态猝灭过程，求得不同温度下的形成常数及热力学函数△H、△G、△S分别为-2.3KJ，-31.2KJ，98.6J，根据热力学函数确定了两者是通过静电作用力结合的。还对荧光猝灭的实验条件进行了优化，建立了蛋白质定量的线性方程△F=20.8C-6.8(μg／mL)，线性响应范围0.04～30.0μg／mL、检出限0.031μg／mL(r=0.9956)，并应用于实际及合成样品中BSA含量的分析。 4 探究铝试剂在不同pH值下的光谱特征时，发现pH为4.04的Britton-Robinson缓冲介质中，铝试剂能与DNA形成复合物，荧光光谱发生紫移，且荧光强度与DNA的量呈线性关系。确定了最佳反应条件，制定了四种核酸的工作曲线，其线性范围宽，灵敏度较高，并用于实际样品的测定。本方法中试剂及反应体系稳摘要定，分析手续简便经济。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-9
第1章绪论  9-26
  1.1 引言  9
  1.2 蛋白质探针的类型及研究进展  9-13
  1.3 核酸探针的类型及研究进展  13-19
  1.4 展望  19
  参考文献  19-26
第2章理论部分  26-32
  2.1 蛋白质与探针分子相互作用模型  26
  2.2 核酸与探针分子相互作用机理  26-28
  2.3 表观结合常数和热力学参数  28
  2.4 猝灭机理  28-30
  参考文献  30-32
第3章实验部分  32-36
  3.1 实验仪器  32
  3.2 试剂  32-33
  3.3 实验方法  33-35
  参考文献  35-36
第4章结果与讨论  36-63
  4.1 碱性品红与牛血清白蛋白的相互作用及其应用  36-44
    4.1.1 碱性品红的荧光光谱  36-37
    4.1.2 实验条件对结合反应的影响  37
    4.1.3 工作曲线  37-38
    4.1.4 共存物质的干扰  38
    4.1.5 样品的测定  38-39
    4.1.6 RL与BSA的相互作用的研究  39-42
    4.1.7 小结  42
    参考文献  42-44
  4.2 碱性品红与DNA相互作用的研究  44-50
    4.2.1 碱性品红的荧光光谱  44-45
    4.2.2 实验条件的优化  45
    4.2.3 工作曲线  45
    4.2.4 干扰成分的影响  45-46
    4.2.5 样品的测定  46-47
    4.2.6 作用机理  47-49
    4.2.7 小结  49
    参考文献  49-50
  4.3 偶氮氯膦(Ⅰ)与蛋白质的相互作用及分析应用  50-57
    4.3.1 荧光光谱  50
    4.3.2 实验条件的优化  50-51
    4.3.3 影响荧光强度的因素  51-52
    4.3.4 工作曲线  52-53
    4.3.5 样品的测定  53-54
    4.3.6 猝灭机理  54
    4.3.7 复合物形成常数及作用力的确定  54-56
    4.3.8 小结  56
    参考文献  56-57
  4.4 铝试剂与核酸相互作用的研究  57-63
    4.4.1 荧光光谱  57-58
    4.4.2 试验顺序的影响  58
    4.4.3 缓冲液用量的影响  58
    4.4.4 铝试剂用量的影响  58
    4.4.5 离子强度的影响  58
    4.4.6 表面活性剂的影响  58-59
    4.4.7 核酸的工作曲线  59
    4.4.8 干扰离子的影响  59-60
    4.4.9 各种DNA样品的测定  60-61
    4.4.10 与一些经典方法的比较  61-62
    4.4.11 小结  62
    参考文献  62-63
致谢  63-64
作者在读硕士期间发表的论文  64-65

染料荧光探针与蛋白质、核酸相互作用的研究

内容摘要

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