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C-端序列分析方法学研究与HWAP-Ⅰ生物活性方面的研究

作　者: 王宇恩
导　师: 梁宋平；谢锦云；王贤纯
学　校: 湖南师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 蛋白质C-端测序 标准氨基酸乙内酰硫脲(TH-AA) 偶联试剂 三苯基锗异硫氰酸酯 三苯基硅异硫氰酸酯
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要


蛋白质序列分析是蛋白质研究中的核心技术。N端测序已经成为十分完善的技术，并已经实现了自动化。C端与N端一样，在蛋白质分子结构分析中具有重要地位，不仅对N端封闭的蛋白质进行序列测定，而且对基因克隆具有指导意义。尽管Schlack-Kumpf降解法的研究进展缓慢，但是近十年研究表明该方法是很有希望成为C端顺序测定的常规方法。 在蛋白质C端（异）硫氰酸法顺序测定技术中，标准氨基酸乙内酰硫脲（TH-AA）的制备是必须首先要解决的问题。本文以L-型氨基酸为原料，采用乙酸酐做活化试剂，TBS-ITC为偶联试剂，制备了20种TH-AA，反应产物通过RP-HELC进行了分离纯化。 本文同时在偶联试剂方面进行了探索，采用合成的13肽（NH2-KKESDFLMFVYLV-COOH）为模型肽，并偶联到DITC玻璃珠上进行了方法学研究。通过实验条件的优化对C-端序列分析的化学方法进行了微量化探索，在0.5nmol规模可获得三个氨基酸C-端序列信号。改变偶联试剂的浓度发现在0.2mol／L可获得最佳的偶联效果。同时应用两种偶联试剂TBS-ITC和TPGe-ITC进行了C-端序列测定的比较，在1nmol规模上对模型肽前4个残基进行了序列分析。其中用TBS-ITC进行序列测定的初始回收率为60.8％，重复回收率为76.7％，用TPGe-ITC进行序列测定的初始回收率为68.8％，重复回收率为81.4％。结果证明TPGe-ITC比TBS-ITC是一种更好的偶联试剂。

全文目录


缩写表(中英文对照)  3-4
中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
第一部分 C-端序列分析的方法学研究  8-49
  第一章 前言  8-15
  第二章 标准氨基酸乙内酰硫脲的制备  15-22
  第三章 合成用于方法学研究的模型肽  22-32
  第四章 两种偶联试剂序列分析的比较  32-46
  第五章 进一步研究设想  46-49
第二部分 有关虎纹镇痛肽的性质研究  49-62
  第一章 HWAP-Ⅰ活性单位测定  49-58
  第二章 HWAP-Ⅰ的稳定性实验  58-62
参考文献  62-67
致谢  67-68
原创性声明  68

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中图分类: > 生物科学 > 生物化学 > 蛋白质
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