学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

红景天苷体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化及其分子机制

作　者: 裴晶晶
导　师: 吴润；赵红斌
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 红景天苷骨髓间充质干细胞神经细胞 Ca2+信号 Wnt/β-catenin信号通路
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 102次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

【目的】大量文献报道具有抗氧化作用的药物能促进骨髓间充质干细胞（BMMSCs）向神经细胞定向分化,红景天苷作为红景天的有效成分,具有较强的神经保护和抗氧化功能。本项研究是以红景天苷对小鼠BMMSCs向神经细胞定向分化的影响为主题,初步探讨红景天苷生物学信号传导机制,为红景天苷作为BMMSCs诱导剂修复神经缺损的临床应用奠定理论基础,为筛选高效中药单体干细胞诱导剂提供科学依据。【方法】体外培养的小鼠BMMSCs达80%融合后开始实验:①设立红景天苷诱导组、阳性对照组和空白对照组,分别作用细胞后,采用免疫细胞化学方法、RT-PCR和Western blot方法检测神经细胞相关分子的表达;②运用不同阻断剂分别阻断细胞Ca²⁺信号通路后检测神经细胞标志分子的表达水平;③检测红景天苷诱导组Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达,运用Dkk-1特异性阻断细胞Wnt/β-catenin信号通路后检测神经细胞标志分子的表达水平;④分析不同Ca²⁺信号通路阻断组Wnt/β-catenin信号通路关键分子的表达水平。【结果】①诱导组可见神经细胞标志分子NSE、β-TubulinⅢ、Nurr1 mRNA的表达,空白对照组未见上述基因的表达。各组神经胶质细胞标志分子GFAP mRNA均无表达。诱导组NSE蛋白的表达丰度随诱导时间延长而增高,而神经干细胞标志物Nestin的表达相反,空白对照组均无表达。②当分别阻断细胞外Ca²⁺、L型Ca²⁺通道、IP3-Ca²⁺信号途径,神经细胞标志分子的表达均下调,其中以IP3-Ca²⁺信号途径阻断组尤为显著（p<0.01）。③诱导组高度表达Wnt/β-catenin信号通路相关分子Wnt3a、Lrp-6、Axin、GSK-3β、β-catenin mRNA和β-catenin蛋白,空白对照组除Axin和GSK-3β有少量表达外,其余均无表达;当Dkk-1阻断Wnt/β-catenin信号通路,β-catenin基因和蛋白均不表达,神经细胞标志分子的表达丰度与诱导组相比明显下调（p<0.01）。④当分别阻断细胞外Ca²⁺、L型Ca²⁺通道、IP3-Ca²⁺信号途径, Wnt/β-catenin信号通路关键分子Wnt3a、Lrp-6、β-catenin mRNA和β-catenin蛋白的表达水平下调,以阻断IP3-Ca²⁺信号途径最为明显（p<0.01）。【结论】红景天苷能诱导BMMSCs向神经细胞分化,其生物学信号的传导与Ca²⁺信号和Wnt/β-catenin信号通路有密切关系,其中IP3依赖的Ca²⁺/Wnt信号途径是实现红景天苷信号传导的重要方式之一。

全文目录

摘要  3-4
Summary  4-8
缩写词英汉对照表  8-9
第一章绪论  9-16
  1 骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究概况  9-15
    1.1 骨髓间充质干细胞  9-10
    1.2 BMMSCS 在神经系统疾病治疗中的应用  10
      1.2.1 细胞治疗  10
      1.2.2 基因治疗  10
      1.2.3 组织工程化组织移植  10
    1.3 骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的发现  10-11
      1.3.1 体内分化  10-11
      1.3.2 体外诱导  11
    1.4 影响骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的因素  11-13
      1.4.1 以细胞生长因子为主的诱导因子  11
      1.4.2 以抗氧化剂为主的诱导因子  11
      1.4.3 以提高胞内cAMP 为主的诱导因子  11-12
      1.4.4 以传统中药为主的诱导因子  12
      1.4.5 生物诱导  12-13
    1.5 可能存在的分化机制及其研究现状  13-14
      1.5.1 MAPK 信号转导通路  13
      1.5.2 Ca~(2+)信号转导通路  13-14
      1.5.3 Wnt 信号通路  14
    1.6 存在的问题与展望  14-15
  2 研究的目的和意义  15
  3 研究的内容和方法  15-16
第二章红景天苷体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化  16-24
  1 材料与方法  16-21
    1.1 材料  16-18
      1.1.1 细胞  16
      1.1.2 主要试剂及耗材  16-17
      1.1.3 溶液的配制  17-18
      1.1.4 主要仪器与设备  18
    1.2 方法  18-21
      1.2.1 细胞培养  18
      1.2.2 体外诱导BMMSCs 向神经细胞分化  18
      1.2.3 免疫细胞化学检测  18-19
      1.2.4 基因检测  19-20
      1.2.5 蛋白分析  20-21
  2 结果与分析  21-22
    2.1 免疫细胞化学鉴定  21-22
    2.2 RT-PCR 鉴定  22
    2.3 Western blot 鉴定  22
  3 讨论  22-24
第三章红景天苷体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的分子机制  24-34
  1 材料与方法  24-27
    1.1 材料  24-25
      1.1.1 细胞  24
      1.1.2 主要试剂与耗材  24
      1.1.3 溶液的配制  24-25
      1.1.4 主要仪器与设备  25
    1.2 方法  25-27
      1.2.1 细胞培养  25
      1.2.2 Ca~(2+)信号通路对红景天苷生物学信号的传导  25
      1.2.3 Wnt/β-catenin 信号通路对红景天苷生物学信号的传导  25-27
      1.2.4 Ca~(2+)信号与Wnt/β-catenin 信号通路在红景天苷生物学信号传导中的关系  27
  2 结果与分析  27-31
    2.1 Ca~(2+)信号通路传导红景天苷生物学信号  27-28
      2.1.1 RT-PCR 分析  27
      2.1.2 Western blot 分析  27-28
      2.1.3 统计学分析  28
    2.2 Wnt/β-catenin 信号通路传导红景天苷生物学信号  28-30
      2.2.1 红景天苷对Wnt/β-catenin 信号通路相关基因蛋白表达的影响  28-29
      2.2.2 Dkk-1 阻断 Wnt/β-catenin 信号途径后红景天苷对 BMMSCs 表达神经细胞标志分子的影响  29-30
    2.3 Ca~(2+)信号和Wnt/β-catenin 信号通路协同作用传导红景天苷生物学信号  30-31
      2.3.1 RT-PCR 分析  30-31
      2.3.2 Western blot 分析  31
      2.3.3 统计学分析  31
  3 讨论  31-34
    3.1 Ca~(2+)信号通路传导红景天苷生物学信号  31-32
    3.2 Wnt/β-catenin 信号通路传导红景天苷生物学信号  32-33
    3.3 Ca~(2+)信号和Wnt/β-catenin 信号通路协同作用传导红景天苷生物学信号  33-34
结论  34-35
致谢  35-36
参考文献  36-41
作者简介  41-42
导师简介  42-43

红景天苷体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化及其分子机制

内容摘要

全文目录

相似论文