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诸葛菜（Orychophragmus violaceus）及甘蓝型油菜（Brassica napus）Toc33基因编码区的克隆与分析

作　者: 廖问陶
导　师: 赵云
学　校: 四川大学
专　业: 生化及分子生物学
关键词: Toc33 Toc34 诸葛菜甘蓝型油菜 RT-PCR
分类号: S188
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

本论文主要内容包括在诸葛菜和甘蓝型油菜中分别克隆得到2个Toc33基因全编码区序列，对这4个序列进行了同源性分析比较。提取了甘蓝型油菜总RNA，通过RT-PCR获得了甘蓝型油菜Toc33cDNA，并对所获得的这几个基因序列以及拟南芥、豌豆和玉米中的Toc33，Toc34序列进行了同源性分析。根据已报道的拟南芥Toc33基因编码区序列，设计一对寡核甘酸引物，以诸葛菜和3529油菜总DNA为模板，进行PCR扩增，结果均扩增得到两条大小相近，约为1500bp的扩增带。将这4条带分别纯化回收，与T载体连接克隆转化得到了这4个DNA片断。对这4个序列进行了序列测定，测序结果通过blast进行同源性比较，结果显示我们成功克隆得到了4个Toc33基因全编码区序列。参考拟南芥Toc33基因序列确定了其开放阅读框架，每个片段均含有7个外显子和6个内含子。其中从诸葛菜获得的2个片段分别长为1475bp和1573bp，从3529油菜获得的2个片段分别长1370bp和1490bp。序列比较显示所克隆得到的这4个Toc33基因，其外显子部分与拟南芥Toc33基因外显子区域均有很高的同源性，而相应的内含子区则差别较大。根据Toc33基因的外显子序列推导得到了其所编码的氨基酸序列，该序列为一个由297个氨基酸残基组成的蛋白质，分子量约为33KD，含有一个四川大学硕士学位论文保守的GTP结合区(40-50位氨基酸)和一个疏水区域(265趁79位氨基酸)，该位置可以形成。螺旋的跨膜区段，对这些氨基酸序列进行同源性分析显示，它们之间以及与拟南芥Toc33蛋白序列都存在着相当高的同源性，说明这个蛋白质是相当保守的。同时，这几个氨基酸序列与另一个叶绿体外膜蛋白转运器构件蛋白Toc34也存在着一定程度的同源性。提取3529油菜幼叶期总RNA，通过RT一PCR技术反转录扩增得到油菜Toc33cDNA全编码区序列，。开放阅读框长894bP，编码297个氨基酸序列，将该氨基酸序列进行同源序列比较分析，可以发现Toc33蛋白有较高的保守性，它与拟南芥Toc33氨基酸序列的同源性达到94.6%，与之前从诸葛菜和甘蓝型油菜Toc33基因推导而来的氨基酸序列同源性分别达到93%，93 .6%，97.4%，98%。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
诸葛菜(Orychophragmus violaceus)和甘蓝型油菜(Brassica napus)Toc33基因编码区的克隆与分析  8-36
  引言  8-10
  1 材料与方法  10-15
    1.1 材料及试剂  10-11
    1.2 实验方法  11-15
  2 结果与分析  15-28
    2.1 诸葛菜(Orychophragmus violaceus)总DNA中Toc33基因PCR扩增结果及产物的克隆鉴定  15-19
    2.2 甘蓝型油菜(Brassica napus)总DNA中Toc33基因编码区PCR扩增结果及其克隆鉴定  19-23
    2.3 甘蓝型油菜Toc33 cDNA的RT-PCR扩增  23-25
    2.4 目前已分离到的其他物种中Toc33和Toc34的同源性比较  25-28
  3 讨论  28-31
  小结  31-32
  参考文献  32-36
文献综述叶绿体被膜上的蛋白质转运器的研究进展  36-65
  1 胞质叶绿体蛋白的种类  37
  2 蛋白转运的信号序列  37-39
  3 叶绿体被膜上的蛋白质转运器  39-48
    3.1 叶绿体外膜蛋白转运器(Toc)  40-47
    3.2 叶绿体内膜蛋白转运器(Tic)  47-48
  4 参与蛋白转运的起他因子  48-50
  5 胞质蛋白通过叶绿体蛋白转运器的转运  50-52
  6 叶绿体蛋白转运器的起源  52-53
  7 结语  53-55
  参考文献  55-65

诸葛菜（Orychophragmus violaceus）及甘蓝型油菜（Brassica napus）Toc33基因编码区的克隆与分析

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