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嵌合1a与1b亚型包膜蛋白基因HCV细胞培养模型的初步研究

作　者: 卢莎
导　师: 沈晓玲；博晓真
学　校: 内蒙古医学院
专　业: 免疫学
关键词: 丙型肝炎病毒嵌合病毒细胞培养
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 11次
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内容摘要

目的通过构建嵌合丙型肝炎病毒(HCV)1a与1b亚型包膜蛋白基因的质粒,建立嵌合型HCV的体外细胞培养模型,为针对中国HCV主要基因型的抗病毒药物筛选和HCV抗原免疫效果评价提供有效模型。方法1.运用融合PCR技术,通过酶切、重组等手段将中国HCV HeBei分离株(1b)和H77株(1a)的全长包膜蛋白基因(E1/E2)引入JFH1株(2a)基因骨架,构建包膜蛋白基因区相互置换的嵌合病毒(1b/2a和1a/2a)全长基因组质粒;2.HCV(1b/2a)和HCV(1a/2a)全长基因组质粒经Xbal单酶切线性化后体外转录获得全长病毒RNA,将RNA转染Huh7.5.1细胞,进行间接免疫荧光、蛋白印迹实验检测。结果1.成功构建了含嵌合病毒1b/2a、1a/2a全长基因组的重组质粒pHe-Bei(E1E2)/JFH1和pH77(E1E2)/JFH1;2.分别以pHeBei(E1E2)/JFH1和pH77 (E1E2)/JFH1为模板,体外转录获得病毒RNA,将RNA转染人肝癌细胞Huh7.5.1细胞,间接免疫荧光法检测72h后转染阳性细胞率为1%～3%,5d后阳性细胞率为20%～50%; Western blot检测到细胞内HCV非结构蛋白NS3和结构蛋白Core的表达。结论本研究首次在国内建立了嵌合中国HCV分离株(HeBei株)基因的HCV细胞培养模型,病毒RNA可在培养细胞中复制和表达,产生嵌合HCV,嵌合型HCV可以在细胞间传播。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
材料与方法  8-13
结果  13-21
讨论  21-23
结论  23
参考文献  23-26
文献综述  26-37
  参考文献  33-37
中英文缩略词  37-38
攻读学位期间发表文章情况  38-39
个人简历  39-40
致谢  40

嵌合1a与1b亚型包膜蛋白基因HCV细胞培养模型的初步研究

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