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谷子（Stetaria italica）中F128基因和F103基因的克隆及其功能的初步研究

作　者: 薛静
导　师: 于静娟
学　校: 中国农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 谷子 cDNA表达文库序列分析
分类号: S515
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

以马铃薯基因SB401cDNA为探针筛选谷子cDNA文库。对筛选得到的5个阳性克隆进行序列测定、数据库同源序列查询，结果三个克隆分别与数据库中已知功能基因有较高同源性。F128和F103分别与数据库中稻P0003D09.9和拟南芥的At2g42190在氨基酸水平上有56％和34％的同源性。选择F128和F103基因进行深入研究。 F128基因由581个核苷酸组成，推测其编码的蛋白质有109个氨基酸，分子量为11,691Da。生物学软件分析结果表明，F128蛋白具有明显的疏水区域，并且具有信号肽序列，可能定位于液泡内。肽链上有多个可以被磷酸化修饰的位点。这些特点可能为F128蛋白发挥其生理功能提供结构基础。基因组Southern杂交结果显示F128基因可能以单拷贝或低拷贝存在于谷子基因组中。Northern杂交结果表明F128基因在授粉后不同时期的未成熟种子中表达，并且随着种子的成熟过程表达水平显著增强。F128在不同植物中的同源基因的Southern杂交分析结果表明，在玉米中存在F128同源基因。为进一步研究F128基因的功能，构建了在花椰菜花叶病毒35S启动子驱动下正义植物表达载体pBO128S，并将其转化烟草。转基因的烟草外植体比对照晚3-4天产生愈伤组织；但转基因烟草再生苗的表型与对照相比没有明显差异。 F103基因由819个核苷酸组成，推测其编码的蛋白质有130个氨基酸，分子量为14,113Da。生物学软件分析结果表明，F103蛋白是一个亲水蛋白，可能定位于核内。肽链上有多个可以被磷酸化修饰的位点。这些特点可能为F103蛋白发挥其生理功能提供结构基础。基因组Southern杂交结果显示F103基因以单拷贝或低拷贝存在于谷子基因组中。Northern杂交结果表明F103基因在叶中不表达，在茎、幼穗、未成熟种子中均表达。F103在不同植物中的同源基因的Southern杂交分析结果表明，在玉米中存在F103同源基因。为进一步研究F103基因的功能，构建了在花椰菜花叶病毒35S启动子驱动下正义植物表达载体pBO103S，并将其转化烟草。转基因的烟草外植体比对照晚一周左右产生愈伤组织；转基因烟草再生苗的表型与对照相比没有明显差异。

全文目录

缩略词  4-5
摘要  5-6
Abstract  6-7
第一章文献综述  7-15
  1.1 植物的表达序列标签(expressed sequence tag, EST)与全基因组测序  7-8
  1.2 植物基因的功能分析  8-13
  1.3 植物人工染色体  13-15
第二章材料与方法  15-27
  2.1 实验材料  15
  2.2 常用培养基和溶液的配制  15-16
  2.3 实验所需试剂及其配制  16-18
  2.4 基本实验方法  18-27
第三章结果与分析  27-50
  3.1 cDNA文库的筛选  27-28
  3.2 F128序列分析及基因功能的初步研究  28-38
  3.3 F103序列分析及基因功能的初步研究  38-50
第四章讨论  50-52
  4.1 谷子cDNA文库的筛选  50
  4.2 F128基因特性和功能的分析  50
  4.3 F103基因特性和功能的分析  50-52
第五章结论  52-53
参考文献  53-56
附录  56-57
致谢  57

谷子（Stetaria italica）中F128基因和F103基因的克隆及其功能的初步研究

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