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部分酿酒葡萄品种的RAPD分析和形态学比较

作　者: 左方梅
导　师: 翟衡
学　校: 山东农业大学
专　业: 果树学
关键词: 酿酒葡萄 RAPD 蛇龙珠形态学
分类号: S663.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 97次
引　用: 2次
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内容摘要

本试验以鉴别酿酒葡萄品种蛇龙珠的身份为重点，利用RAPD技术研究了与蛇龙珠的解百纳香型一致的、广泛栽培于法国波尔多的品种群：赤霞珠、品丽珠、梅露汁、高特及白索味浓；以及其他已知起源于同一个家族或关系密切的不同品种群，如黑白比诺、霞多丽、雷司令和贵人香等共14个品种的遗传多样性。鉴于国内栽培的蛇龙珠存在着不同的类型，本实验还选取了三个不同类型的蛇龙珠进行遗传多样性分析，并对蛇龙珠和与其亲缘关系较近的品种进行了形态学比较，研究结果如下：1. 利用CTAB法提取葡萄DNA，质量可以达到RAPD反应要求，且操作简便易行。通过对RAPD反应条件进行优化，得出了适合于葡萄的RAPD反应体系，获得了重复性好，稳定，清晰的条带。2. 利用36个引物对14个品种进行扩增，得到了14个扩增条带多、多态性好、重复性好的引物用于RAPD分析。14个品种共扩增出137条DNA带，平均每个引物9.8条，其中98条具有多态性，占总条带数的71.5%，每个引物可扩增出3-10条多态性带，平均为每个引物7条多态性带。3. 利用欧氏距离计算各品种间的遗传距离，变化范围在3.32-7.48之间，其中梅露汁和品丽珠最近为3.32，蛇龙珠和黑比诺最远为7.48。根据遗传距离进行聚类分析，将14个品种分为四类，类群1由霞多丽、白比诺、黑比诺、雷司令、贵人香、白诗南和西拉构成，类群2由白索味浓和佳利酿构成，类群3由赤霞珠、品丽珠、蛇龙珠、梅露汁构成；类群4由高特单独构成。4. 通过遗传距离和聚类图发现，蛇龙珠品种和其它酿酒葡萄品种间基因型差异明显，利用14个引物很容易将其和其他品种区分开。与蛇龙珠遗传距离较近的品种依次为品丽珠、梅露汁和赤霞珠，均属于解百纳家族。通过对三种不同表现型的蛇龙珠品种进行RAPD分析发现，三种蛇龙珠类型存在基因型差异，但三种类型蛇龙珠间的遗传差异小于蛇<WP=6>5. 龙珠与其他品种之间的差异。6. 将三种类型蛇龙珠及与其遗传关系较近的品丽珠、梅露汁、赤霞珠进行叶片形态学比较，结果发现，蛇龙珠和其它三个品种在新梢、绒毛、裂刻、叶柄洼等形态上存在差异，三个类型蛇龙珠在绒毛、锯齿、叶片形态上存在差异。通过对形态指标进行数字化比较发现：不同类型蛇龙珠之间及蛇龙珠品种和其他品种之间在叶型参数和锯齿上均存在差异，符合RAPD分析结果。7. 阐明了蛇龙珠的起源问题，认为蛇龙珠是解百纳家族的一员，是一个独立的品种。最初引进烟台的蛇龙珠极有可能在引进国就是某一个解百纳家族品种的变异类型，并包含多个变异类型，而且未进行正式命名和推广，这和以前的研究结果不同。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
英文缩略词  10-11
1．引言  11-19
  1．1 酿酒葡萄与葡萄酒产业概况  11-13
    1．1．1 世界酿酒品种资源  11
    1．1．2 酿酒品种在葡萄生产上的地位  11-12
    1．1．3 我国酿酒葡萄与葡萄酒产业  12-13
  1．2 葡萄品种鉴定、分类研究概况  13-17
  1．3 RAPD标记在品种鉴定中的应用  17
  1．4 关于蛇龙珠起源的研究  17-18
  1．5 本课题研究的目的、意义  18-19
2．材料与方法  19-23
  2．1 实验材料  19-21
    2．1．1 供试品种  19
    2．1．2 酶及主要试剂  19
    2．1．3 主要仪器  19
    2．1．4 溶液配制  19-21
  2．2 实验方法  21-23
    2．2．1 基因组DNA提取  21-22
    2．2．2 PCR扩增  22
    2．2．3 电泳分析  22
    2．2．4 数据分析  22-23
3．结果与分析  23-47
  3．1 基因组DNA提取  23
  3．2 RAPD反应条件的优化  23-27
    3．2．1 模板浓度对RAPD反应的影响  23-24
    3．2．2 dNTPs、引物浓度对RAPD反应的影响  24-25
    3．2．3 Mg~（2+）浓度对RAPD反应的影响  25-24
    3．2．4 Tag酶浓度对RAPD反应的影响  24-27
  3．3 酿酒葡萄品种的RAPD分析  27-36
    3．3．1 引物的筛选  27-28
    3．3．2 PCR扩增  28
    3．3．3 酿酒葡萄品种的RAPD扩增结果  28-31
    3．3．4 品种特异带或带型分析  31-33
    3．3．5 聚类分析  33
    3．3．6 酿酒葡萄品种间的遗传关系分析  33-35
    3．3．7 蛇龙珠品种的RAPD分析  35-36
  3．4 不同表现型蛇龙珠品种的RAPD分析  36-39
  3．5 蛇龙珠类型与赤霞珠、品丽珠、梅露汁品种的形态学比较  39-47
    3．5．1 比较对象和方法  39-41
    3．5．2 不同类型蛇龙珠植物学性状描述  41
    3．5．3 赤霞珠、品丽珠、梅露汁叶梢形态描述  41-44
    3．5．4 蛇龙珠类型和赤霞珠、品丽珠、梅露汁品种叶片的数字化差异比较  44-47
4．讨论  47-52
  4．1 RAPD技术用于葡萄品种鉴定的可行性  47
  4．2 RAPD技术用于鉴定葡萄品种来源、无性系变异或不同表现型的可行性  47-48
  4．3 关于蛇龙珠来源的探讨  48-51
  4．4 关于葡萄品种的亲缘鉴定  51-52
5．结论  52-53
参考文献  53-62
附图  62-64
致谢  64

部分酿酒葡萄品种的RAPD分析和形态学比较

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