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重组细粒棘球蚴亲肌肉抗原抗小鼠感染细粒棘球蚴的免疫保护性及其机制研究

作　者: 孙俊锋
导　师: 赵巍
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 遗传学
关键词: 细粒棘球蚴重组亲肌肉抗原疫苗候选分子免疫机制
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
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内容摘要

目的:对构建的纯化重组亲肌肉抗原(rEg.myophilin)进行免疫保护和免疫机制的研究,为包虫病分子疫苗的研制提供新的候选分子。方法:(1)疫苗制备:重组Eg.myophlilin/pET-28a工程菌株的大量表达、纯化及疫苗制备。(2)动物分组方案:选取111只小鼠随即分为A、B对照组和实验组C组,分别对其进行皮下PBS、PBS+佐剂和PBS加佐剂加候选疫苗的注射,之后分别用同样的试剂对其对应组进行两次加强免疫;最后用1500只细粒棘球蚴的原头蚴腹腔攻击感染。(3)免疫保护力计算:(免疫保护力计算公式:减囊率=1-实验组平均包囊数/对照组平均包囊数×100%)。(4)对小鼠进行免疫保护机制的研究,①体液免疫抗体指标的测定:从领取小鼠开始按不同的时间点,分别分批次对小鼠采血,进行血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE水平的测定;②细胞免疫检测:从领取小鼠即开始按不同的时间点,分别分批次对小鼠取脾脏,并脾细胞刺激培养,监测其细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10的水平。结果:(1) rEg。myophilin能诱导小鼠产生86.11%以上的免疫保护力。(2)采集血清进行ELISA血清抗体IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE以及细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10的检测,结果表明:抗体IgG、IgG1、IgG2a以及IgE,和细胞因子IFN-γ、IL-4分别在免疫之后出现了增高,对照组IL-10在攻击感染后出现了明显的增高,而在实验组则没有相应的增高。结论:(1)rEg.myophilin为极具应用潜质的疫苗候选分子。(2)对rEg.myophilin产生的免疫保护性可能机制:①抗体介导的体液免疫,IgG及其亚类IgG1和IgE介导的体液免疫,在抗细粒棘球蚴感染过程中发挥重要作用;②细胞免疫中,细胞因子水平变化显示Th1类免疫应答在试验组免疫保护中占优势作用,有利于机体抵御细粒棘球蚴的感染;③该疫苗候选分子的注入使得免疫抑制机制得到了有效地阻遏,有利于机体的抗寄生虫。④体液免疫和细胞免疫相辅相成,相互促进,表现在:IL-4在IgE亚型类别转换中起到了关键的作用,这一机制可能直接影响着IgE参与的嗜酸性粒细胞相关的抗寄生虫感染。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
中英文缩略词表  8-10
前言  10-14
实验内容  14-37
  （一） rEg.myophilin/ pET-28a /BL21 菌株的优化表达纯化、候选疫苗的制备  15-22
    1. 材料  15
    2. 方法  15-19
    3. 结果  19-22
  （二） rEg.myophilin 疫苗候选分子诱导小鼠的免疫保护力及相关免疫指标的动态研究  22-37
    1. 材料  22
    2. 方法  22-25
    3. 结果  25-37
讨论  37-39
结论  39-40
参考文献  40-43
综述  43-52
  细粒棘球蚴病的宿主免疫和免疫逃避研究进展  43
  1 细胞因子在宿主感染棘球蚴中的调节作用  43-45
  2 抗体与细胞因子对棘球蚴感染的调节作用  45-47
  3 病原体对机体的免疫逃避  47-48
  4 结语  48-49
  参考文献  49-52
附录  52-60
  试剂配制  52-58
  常用仪器设备  58-60
致谢  60-61
读学位期间发表的学术论文  61-62
个人简历  62

重组细粒棘球蚴亲肌肉抗原抗小鼠感染细粒棘球蚴的免疫保护性及其机制研究

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