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Akt基因与先天性心脏病发生关系的研究

作　者: 束亚琴
导　师: 莫绪明
学　校: 南京医科大学
专　业: 儿科学
关键词: 先天性心脏痫 Aktl 单核苷酸多态性心脏发育
分类号: R725.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 32次
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内容摘要

目的分析CHD(Congenital Heart Disease，先天性心脏痫)患儿Aktl及Akt2基因的第1-4个外显子(编码PHD(Plecks~in Homologue Domain，PH结构域))的突变情况，检测Akt蛋白表达，期望为进一步阐明CHD发痫的分子机理提供新的实验依据。方法选取18例接受手术治疗的CHD患儿作为研究对象，体外循环开始前采集外周血分离淋巴细胞，根据试剂盒步骤提取基因组DNA(Deoxyribonucleic Acid，脱氧核糖核酸)后，应用PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)扩增后进行PCR产物纯化及测序，分别筛查分析Aktl以及Akt2基因PHD(第14个外显子)的突变情况，Aktl以及Akt2基因序列来源于GenBank(编号分别为NM001014432和NM 001626)。采用Western blotting(蛋白免疫印迹法)分析患儿外周血淋巴细胞中Aktl蛋白的表达情况。结果通过测序分析，所有样本的Aktl以及Akt2基因的PHD部分未发现突变；在Akt2第1-3个内含子部分未筛查到突变，在Aktl第1-3个内含子部分共筛查到以下5个单核苷酸多态性位点即SNP(Single Nucleotide Polymorphism，单核苷酸多态性)，检出率分别为：C15674T(5 6％)，A15756T(72 2％），A19115G(88 9％），C19155T(5 6％)和A19853G(88 9％。将以上结果与PUBMED数据库已发表公布Aktl的所有SNP位点进行比较，发现其中三个SNP已有报道，分别为A19853G(PUBMED编号rs2498797)，C15674T(rs3730358)，C19155T(rsl7846822)；另两个未被报道过新SNP即A15756T和A191 15G。此外，有研究显示以上SNP中的rs3730358可能影响A／a一』的蛋白表达水平，并且该sNP已被证实与精神分裂症的发痫相关。因此我们采用westem blotting方法分析了患儿外周血中Aktl蛋白的表达，发现在伴有rs3730358多态性改变的样本中，Aktl蛋白的表达水平降低。结论转基因及基因敲除小鼠模型已经证实Aktl蛋白是心血管发育及功能正常的重要调节因子，因此本研究中Aktl基因的单核苷酸多态性改变以及Aktl蛋白表达水平降低提示Aktl可能参与先天性心脏痫的发痫过程。且该sNP已被证实与精神分裂症的发痫相关。因此我们采用westem blotting方法分析了患儿外周血中Aktl蛋白的表达，发现在伴有rs3730358多态性改变的样本中，Aktl蛋白的表达水平降低。结论转基因及基因敲除小鼠模型已经证实Aktl蛋白是心血管发育及功能正常的重要调节因子，因此本研究中Aktl基因的单核苷酸多态性改变以及Aktl蛋白表达水平降低提示Aktl可能参与先天性心脏痫的发痫过程。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-11
材料与方法  11-23
结果  23-29
讨论  29-34
小结  34-35
参考文献  35-38
文献综述  38-53
  参考文献  47-53
附录1  53-54
附录2  54-62
附录3  62-63
致谢  63

Akt基因与先天性心脏病发生关系的研究

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