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类胡萝卜素与槲皮素对白血病K562细胞增殖及PPARγ蛋白表达影响的研究

作　者: 郭朋辉
导　师: 赵文恩
学　校: 郑州大学
专　业: 应用化学
关键词: K562细胞 类胡萝卜素 槲皮素 PPARγ
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


越来越多的研究表明,类胡萝卜素是重要的生物抗氧化剂。进一步的细胞培养和动物实验结果显示,β-胡萝卜素,以及其它饮食中存在的类胡萝卜素在预防和抑制癌症发生上有重要的作用。槲皮素(3,3′,4′,5,7-五羟基黄酮)属类黄酮化合物,具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、降血压、抗心律失常、抗血小板聚集等广泛的药理作用,且毒副作用低。PPARγ是一种核激素受体,在脂肪细胞分化方面起着关键作用,研究表明,PPARy也在许多人癌细胞中表达。在脂肪肉瘤和乳腺癌细胞中该受体激活可抑制细胞生长并诱导细胞分化。本研究以白血病细胞系K562细胞为靶细胞,研究类胡萝卜素与槲皮素抑制K562细胞的增殖,上调PPARγ蛋白表达的作用,探讨类胡萝卜素及槲皮素抑制肿瘤细胞生长的作用机制。分别用不同浓度(0.5μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L)的类胡萝卜素(β-胡萝卜素、胭脂树橙和辣椒红素)与槲皮素处NK562细胞,通过台盼蓝拒染法检测其对K562细胞生长的影响,采用MTT法检测其对K562细胞活力的抑制率,用Western-blotting从蛋白分子水平上检测类胡萝卜素与槲皮素对PPARγ蛋白表达的影响。研究结果显示:类胡萝卜素与槲皮素处理组细胞的生长速度明显低于对照组,随着作用时间的延长,胭脂树橙、辣椒红素及槲皮素用药组活细胞数量逐渐减少,并呈现一定的时效关系。在显微镜下可观察到下述细胞形态学改变:经类胡萝卜素与槲皮素干预的细胞,特别是处理时间越长、处理剂浓度越高时细胞数明显减少,细胞大小不一、形态不规则,并可见许多细胞碎片;MTT结果显示:类胡萝卜素与槲皮素显著抑制细胞的增殖并呈浓度依赖关系。蛋白质免疫检测结果显示:一定浓度的β-胡萝卜素、胭脂树橙、辣椒红素及槲皮素能够上调PPARγ蛋白的表达,可诱导K562细胞的凋亡。结论:PPARγ表达的上调可能是类胡萝卜素和槲皮素抑制K562细胞增殖诱导其凋亡的原因之一,其中,类胡萝卜素与槲皮素是起着PPAR7非特异配体的作用。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-7
目录  7-9
第一章 前言  9-23
  1.1 类胡萝卜素的生物学功能  9-12
    1.1.1 医学生物学功能  9-11
    1.1.2 细胞生物学功能  11-12
  1.2 类胡萝卜素的分布  12
  1.3 β-胡萝卜素、辣椒红素及胭脂树橙的性质及生理活性  12-15
    1.3.1 β-胡萝卜素的性质及生理活性  12-13
    1.3.2 胭脂树橙的性质及生理活性  13-14
    1.3.3 辣椒红素的性质及生理活性  14-15
  1.4 槲皮素的性质及功能  15-18
    1.4.1 槲皮素分布及性质  16
    1.4.2 槲皮素的功能  16-18
  1.5 白血病的国内外研究现状  18-19
  1.6 PPARγ与肿瘤  19-21
  1.7 研究的目的、内容和意义  21-23
第二章 实验  23-28
  2.1 材料  23
  2.2 试剂配制方法  23-24
  2.3 仪器与设备  24
  2.4 实验方法  24-27
    2.4.1 样品制备  24-25
    2.4.2 细胞培养及加药处理  25
    2.4.3 台盼蓝拒染法检测细胞增殖  25-26
    2.4.4 MTT(噻唑蓝)法检测细胞抑制率  26
    2.4.5 Western-blotting检测细胞中的PPARγ蛋白表达  26
    2.4.6 几种类胡萝卜素及槲皮素抗氧化能力测定  26-27
  2.5 统计学分析  27-28
第三章 结果与分析  28-43
  3.1 类胡萝卜素和槲皮素对K562细胞生长的影响  28-31
    3.1.1 类胡萝卜素对K562细胞生长的影响  28-30
    3.1.2 槲皮素对K562细胞生长的影响  30-31
  3.2 类胡萝卜素和槲皮素对K562细胞活力的影响  31-35
    3.2.1 类胡萝卜素对K562细胞活力的影响  32-34
    3.2.2 槲皮素对K562细胞活力的影响  34-35
  3.3 类胡萝卜素和槲皮素对PPARγ蛋白表达的影响  35-37
    3.3.1 类胡萝卜素对PPARγ蛋白表达的影响  35-37
    3.3.2 槲皮素对PPARγ蛋白表达的影响  37
  3.4 FRAP法测定抗氧化能力(TAC)结果  37-39
    3.4.1 类胡萝卜素与槲皮素的抗氧化能力  38-39
    3.4.2 类胡萝卜素及与槲皮素结合的抗氧化能力  39
  3.5 讨论  39-43
    3.5.1 类胡萝卜素对K562细胞增殖及PPARγ蛋白表达的影响  39-40
    3.5.2 槲皮素对K562细胞增殖及PPARγ蛋白表达的影响  40-43
第四章 结论  43-44
参考文献  44-49
致谢  49-50
攻读硕士研究生期间发表的论文  50

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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