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地塞米松调控胰岛β细胞内PDX-1、FoxO1表达的机制研究

作　者: 骆莺
导　师: 韩晓
学　校: 南京医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 地塞米松转录调控 PDX-1 FoxO1 FoxA2
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 82次
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内容摘要

临床上长期使用糖皮质激素类药物会产生一系列严重的副作用，包括类固醇性糖尿病（steroid diabetes mellitus,SDM）。地塞米松（Dexamethasone），被证实可以通过促进胰岛β细胞内FoxO1表达、抑制PDX-1表达从而引起β细胞功能障碍；然而，其具体的分子调控机制尚不清楚。肝细胞核因子FoxA2作为Forkhead家族关键的转录因子，调控着胰腺与胰岛细胞内重要基因的表达，可能参与了PDX-1及FoxO1的调控。本研究中我们探讨了在地塞米松作用下，RINm5F细胞内FoxA2对FoxO1及PDX-1的转录调控机制。通过荧光定量PCR及WesternBlot检测方法证实，地塞米松短时间内即可诱导FoxO1的表达，同时抑制PDX-1的表达。在Transfac? Professional 7.0软件分析结果的基础上，借助于过表达FoxA2及染色质免疫共沉淀（CHIP）技术确定了肝细胞核因子FoxA2能与FoxO1启动子（-1219/-1006bp）区域结合并促进FoxO1的表达。此外，CHIP定量结果显示胰岛β细胞在短时间地塞米松刺激时，结合在PDX-1启动子区的FoxA2将与PDX-1启动子发生解离，转而与FoxO1启动子区结合，导致PDX-1表达下降，同时FoxO1表达上升；随着时间的延长，表达上升的FoxO1与FoxA2竞争PDX-1启动子区共同的DNA结合位点（即5’-AGTGCTAAGCAAACA-3’），进一步维持了β细胞内PDX-1低表达的状态。尽管在地塞米松作用下FoxA2调控的下游靶基因发生明显改变，然而其表达水平及转录活性并无明显变化。总之，我们的研究表明地塞米松能通过调节FoxA2与其靶基因启动子的结合促进FoxO1的表达，同时抑制PDX-1表达；而FoxO1高表达具有抑制FoxA2的促进PDX-1基因转录的作用。这是一种转录因子间的新的转录调控方式，为地塞米松引起胰岛β细胞功能障碍的分子机制补充了新的观点。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-7
前言  7-10
材料与方法  10-32
  1 实验材料  10-11
  2 研究方法  11-32
结果  32-42
  1. 地塞米松刺激胰岛细胞引起Fox01 和PDX-1 表达水平的变化  32-34
  2. 转录因子FoxA2 对Fox01 表达水平的调控作用  34-36
  3. 转录因子Fox2 与Fox01 的启动子相结合  36-37
  4. 地塞米松刺激胰岛β细胞引起FoxA2 和Fox01 转录活性的变化  37-38
  5. 地塞米松刺激胰岛β细胞不引起FoxA2 表达水平和出入核的变化  38-41
  6. 地塞米松刺激下FoxA2 调控Fox01 及PDX-1 机制模式图  41-42
分析与讨论  42-45
小结  45-46
参考文献  46-52
综述  52-81
  参考文献  59-81
攻读学位期间发表文章  81-82
致谢  82

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