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雷公藤药材有效组分群制备及其质量分析

作　者: 孙欣光
导　师: 马淼；黄文华
学　校: 石河子大学
专　业: 植物学
关键词: 雷公藤有效组分群免疫抑制活性二萜倍半萜
分类号: S567.19
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook F.)系卫矛科雷公藤属木质藤本植物,是我国传统中草药,雷公藤所含有效成分种类多、含量低,但活性显著,其中的二萜类、生物碱类和三萜类等成分具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤、抗生育等明显的生理活性。本文对雷公藤属植物资源、化学成分、有效成分制备、药理毒理作用、临床应用等方面做了文献评述。雷公藤是作为传统的中草药,其中药制剂被用于治疗类风湿性关节炎,治疗效果显著。其中雷公藤甲素因活性较强,被普遍用作雷公藤类制剂的质量指标和限量指标成分。然而,雷公藤制剂多是粗提物,化学成分很复杂,单纯以某一种化合物不能全面说明其生物活性,单一成分作为质量控制指标显然是不科学的。因此,寻找雷公藤药材及其制剂的科学有效的质量评价方法是目前雷公藤研究中亟需解决的问题。为此,本实验开展了雷公藤有效组分群的制备和质量分析的研究工作。本实验研究内容为：(1)利用动物体内试验方法,比较雷公藤药材(去皮木质部)不同提取物及其各分段部位的免疫抑制作用活性；(2)利用不同的色谱填料(正相和反相),对免疫抑制作用活性较好的雷公藤醇提物及其氯仿部位进行不同活性大小的有效组分群的制备,并利用TLC、HPLC和UPLC等技术对其检测；(3)利用HPLC和UV法对雷公藤醇提物的不同分段部分中甲素、总二萜内酯、总生物碱的含量进行了检测；(4)利用现代分离技术(中压、HPLC制备等)并结合现代波谱技术,对采自浙江省的雷公藤药材的醇提物的乙酸乙酯部分进行了化合物的分离、纯化与结构鉴定。结果显示：1、95%醇提取物、氯仿部位分和乙酸乙酯部位分对小鼠溶血素抗体的生成有抑制作用,显示其免疫抑制活性。2、MDS-反相树脂固定相在甲醇-水系统下对氯仿部位分段效果较好,确定了雷公藤醇提物的氯仿部位中有效组分群的最佳分段分离条件。3、甲素、总二萜内酯、总生物碱的含量进行了检测,它们在不同部位中的含量存在明显的差异,其中,在氯仿部位和乙酸乙酯部位中的含量较高。4、同时,利用UPLC对氯仿分段的三个有效组分群的指纹图谱进行了分析,指认了其中的部分二萜内酯类和倍半萜生物碱类成分的色谱峰,分析了含量较高的成分的类型,其中二萜内酯类和生物碱类成分含量较高。5、分得到7个化合物,分别为：2个二萜成分：雷酚萜甲醚(triptonoterpene methy lether,cp1)和雷酚内酯(triptophenolide, cp4);2个倍半萜生物碱成分：雷公藤吉碱(Wilforgine,cp5)和雷公藤次碱(Wilforine, cp6);1个三萜成分：任卡漆-5-烯-3β,28-二醇(Glut-5-en-3β, 28-diol, cp3);2个甾醇类化合物：β-谷甾醇(β-Sitosterol, cp2)和胡萝卜苷(daucosterol,cp7)。其中,cpl、cp4、cp5、cp6是报道有活性的化合物。本实验通过对雷公藤不同有效组分群制备工艺研究,并结合雷公藤抗炎免疫药效活性筛选结果,建立以多个抗炎免疫活性成分的UPLC含量测定和指纹图谱定性分析相结合的雷公藤药材质量评价方法,从含量限度和整体化学特征两方面,全面科学地评价和有效控制雷公藤药材及其制剂的内在质量,为中国雷公藤药材资源的可持续发展奠定基础。

全文目录

摘要  8-10
ABSTRACT  10-12
前言  12-13
第一章研究概况  13-28
  1.1 雷公藤属植物资源  13-14
    1.1.1 雷公藤属植物及其野生资源  13
    1.1.2 雷公藤的生药鉴别  13-14
  1.2 雷公藤的化学成分研究  14-22
    1.2.1 二萜  15-16
    1.2.2 三萜  16-20
    1.2.3 生物碱  20-22
    1.2.4 其他成分  22
  1.3 雷公藤的药理作用  22-25
    1.3.1 抗炎作用  22-23
    1.3.2 免疫抑制作用  23
    1.3.3 抗肿瘤作用  23
    1.3.4 抗HIV病毒作用  23-24
    1.3.5 抗排异作用  24
    1.3.6 抗生育作用  24-25
  1.4 毒理作用  25
  1.5 雷公藤的临床应用  25-26
    1.5.1 类风湿性关节炎  25
    1.5.2 肾脏疾病  25
    1.5.3 红斑狼疮  25-26
    1.5.4 器官移植  26
    1.5.5 治疗子宫肌瘤  26
  1.6 雷公藤有效成分的制备  26-28
    1.6.1 物理法  26
    1.6.2 化学法  26-27
    1.6.3 生物法  27-28
第二章雷公藤提取物及其分段部位的制备和免疫抑制活性研究  28-33
  2.1 雷公藤提取物及其分段部位的制备  28-31
    2.1.1 仪器、试剂及材料  28-29
    2.1.2 方法与结果  29-31
  2.2 雷公藤提取物及其分段部位免疫活性研究  31-32
    2.2.1 实验样品  31
    2.2.2 实验动物  31
    2.2.3 实验方法:对小鼠溶血素抗体生成的影响  31
    2.2.4 实验结果  31-32
  2.3 结论  32-33
第三章雷公藤氯仿部位中有效成分组群的制备  33-40
  3.1 仪器、试剂及材料  33-34
    3.1.1 仪器  33
    3.1.2 试剂  33-34
    3.1.3 实验样品  34
  3.2 方法与结果  34-39
    3.2.1 不同色谱填料的考察  34-38
    3.2.2 不同洗脱系统的比较  38-39
  3.3 小结与讨论  39-40
第四章雷公藤氯仿部位及其有效成分组群的成分分析  40-51
  4.1 雷公藤醇提物及各部位中有效成分的含量测定  40-44
    4.1.1 材料、试剂及仪器  40-41
    4.1.2 方法  41-42
    4.1.3 结果及分析  42-43
    4.1.4 讨论  43-44
  4.2 雷公藤氯仿部位及其不同有效组分群UPLC图谱比较  44-50
    4.2.1 氯仿部位HPLC图谱与UPLC图谱的比较  44-45
    4.2.2 不同有效组分群UPLC谱图分析  45-50
  4.3 不同有效组分群中对照化合物单体的药理活性  50
  4.4 结果和讨论  50-51
第五章雷公藤有效组分群中活性成分的制备  51-62
  5.1 仪器、试剂及材料  51-52
    5.1.1 仪器  51-52
    5.1.2 实验药材  52
    5.1.3 实验试剂与试药  52
  5.2 化合物的提取和分离  52-54
    5.2.1 提取过程  52-53
    5.2.2 分离过程  53-54
  5.3 化合物的结构鉴定  54-62
    5.3.1 化合物的结构解析  54-58
    5.3.2 化合物的波谱数据  58-62
第六章结论与展望  62-63
  6.1 结论  62
  6.2 建议和展望  62-63
参考文献  63-68
致谢  68-69
作者简历  69-70
石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表  70-71
附图  71-82

雷公藤药材有效组分群制备及其质量分析

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