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旁分泌机制在骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死中作用的研究

作　者: 范红友
导　师: 沈振亚
学　校: 苏州大学
专　业: 胸心血管外科学
关键词: 骨髓间充质干细胞条件培养液心肌梗死旁分泌作用
分类号: R542.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究骨髓间充质干细胞条件培养液对心梗后心功能的影响,对心肌细胞凋亡的影响;检测干细胞在缺血缺氧作用下分泌的细胞因子,探索旁分泌机制在干细胞治疗心肌梗死中的作用。方法:取8周龄SD大鼠的胫骨及股骨无菌条件下分离骨髓,用全骨髓差异贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs),并取第3代干细胞,用终浓度20umol/LBrdU标记72h,备用。采用开胸结扎前降支建立SD大鼠心肌梗死模型。实验分组,SD大鼠20只,雌雄不拘,随机分为4组:A组:对照组,建模成功2周后经尾静脉输注生理盐水200ul;B组:DMEM/F12组,结扎前降支,2周后经尾静脉输注无血清培养基200ul;C组:MSCs组,建模成功2周后经尾静脉输注骨髓间充质干细胞1×10~6/200ul;D组:条件培养液组,建模成功2周后经尾静脉输注条件培养液200ul;各组于心梗前、心梗后、移植后心脏超声评估心功能,干细胞、条件培养液移植后4周获取动物心脏,并通过Ⅷ因子免疫组化染色计数不同组动物新生毛细血管密度,TTC法计算心肌梗死面积,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,采用BrdU免疫组化检测归巢到心肌内干细胞, ELISA法对干细胞条件培养液的细胞因子进行定性、定量分析。结果:(1)多普勒超声心动图检测心梗前后心功能:与A组、B组比较, C组、D组移植后4周LVEDd、LVEDs、EF改善明显,有统计学意义(P<0.05);(2)SD大鼠心梗后梗死面积检测:与A组、B组比较,C组、D组,梗死面积显著减小,差异有统计学意义(P<0.05);(3)各组心肌细胞凋亡率比较:C组、D组和A组、B组比较,凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);(4)Ⅷ因子免疫组化检测各组新生血管密度变化结果显示,C组、D组新生血管明显增多,与A组、B组,比较差异有统计学意义(P<0.05);(5)BrdU免疫组化检测结果,C组观察到归巢的骨髓间充质干细胞,A、B、D组均未发现;(6)ELISA检测到干细胞培养液中含有VEGF、bFGF、IL-6而不含有IL-10、IL-2。.结论:1.骨髓间充质干细胞条件培养液可以改善大鼠心肌梗死后心功能2.骨髓间充质干细胞条件培养液促进心肌毛细血管新生,抗心肌细胞凋亡,从而提高心梗大鼠的心功能,可能是由于含有VEGF、bFGF。3.骨髓间充质干细胞高表达IL-6,其可能参与抑制Th0细胞向Th1细胞分化,从而发挥免疫调节作用。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-11
第一部分干细胞培养和大鼠心梗模型建立  11-22
  一 MSCs 的分离、传代培养、鉴定、条件培养液的收集  11-15
    材料  11
    方法  11-13
    结果  13-14
    讨论  14-15
  二大鼠心肌梗死模型的建立  15-22
    材料  15
    方法  15-17
    结果  17-19
    讨论  19-22
第二部分骨髓间充质干细胞条件培养液对大鼠心梗后心功能影响  22-37
  材料  22
  方法  22-26
  结果  26-33
  讨论  33-37
第三部分干细胞条件培养液成分分析  37-46
  材料  37
  方法  37-39
  结果  39-40
  讨论  40-46
结论  46-47
参考文献  47-51
综述  51-58
  参考文献  55-58
缩略词表  58-59
攻读学位期间公开发表的论文  59-60
致谢  60-61

旁分泌机制在骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死中作用的研究

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