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福建省杨梅不同品种的RAPD分析

作　者: 童燕霞
导　师: 王家福
学　校: 福建农林大学
专　业: 果树学
关键词: 杨梅 RAPD 亲缘关系聚类分析遗传多样性
分类号: S667.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本研究以福建省的30份杨梅品种为材料,摸索出适合杨梅叶片基因组DNA的提取方法；建立并优化了杨梅RAPD反应体系和扩增反应的程序；采用RAPD标记结合聚类分析,进行了福建省杨梅不同品种的亲缘关系与遗传多样性研究。主要研究结果如下：1.杨梅叶片DNA提取方法的建立针对杨梅叶片富含多糖、多酚类、色素等物质的特点,采用改良的CTAB法来提取杨梅基因组DNA。首先,以新鲜幼嫩的杨梅叶片为材料,在提取DNA之前先进行预磨样,有效地解决了提取DNA时样品处理时间长短不一、同一批次DNA质量和产率相差较大等问题,这是提取高质量杨梅基因组DNA的关键技术之一。其次,在细胞核被裂解之前,加入DNA提取洗净液先除糖,能有效地消除糖类物质的干扰。再次,在提取液中加入2%的PVP和β-巯基乙醇,有效地抑制了多酚类物质和其它物质的氧化。从而提取了较高纯度和产量的DNA,适宜作为杨梅品种的RAPD分析。2.杨梅RAPD反应体系的优化在参考一般RAPD分析的反应程序的基础上,经过反复试验确定适宜的PCR扩增程序为：94℃预变性3min;94℃变性30s；37℃退火30s；72℃延伸90s,38个循环；最后一次72℃延伸7min。优化的杨梅RAPD反应体系为：在20gL扩增反应总体积中,包含2.0μL 10×Buffer缓冲液、2.5mmol/L MgCl2、0.25mmol/L dNTPs、1.5μmol/L引物、40rig模板DNA和1.0U Taq DNA聚合酶。3.杨梅RAPD标记的多态性程度分析从171个RAPD随机引物中筛选出14个具特异扩增的多态性引物,对福建省30份杨梅基因型进行扩增,共扩增出155条RAPD标记条带,其中多态性带130条,多态性百分率为83.8%,平均每个引物检测到的条带数为9.3条。4.杨梅品种RAPD标记的聚类分析RAPD标记的福建省30份杨梅品种两两之间的遗传相似系数均在0-1之间。王子安海与早生安海之间的的遗传相似系数最大,而桐子杨梅与晚稻杨梅的亲缘关系最远。

全文目录

缩略词  8-9
摘要  9-10
Abstract  10-12
第一章引言  12-27
  1.1 杨梅品种资源的分布  12
  1.2 杨梅品种资源的概况  12-13
  1.3 杨梅品种的分类研究  13-14
  1.4 生物技术在杨梅分类研究中的应用  14-15
    1.4.1 同工酶分析  14-15
    1.4.2 RAPD分子标记分析  15
  1.5 DNA分子标记研究  15-26
    1.5.1 遗传标记与分子标记的概念  15-16
    1.5.2 分子标记的种类及特点  16-23
      1.5.2.1 基于Southern杂交的分子标记  16-17
      1.5.2.2 基于PCR技术的分子标记  17-20
      1.5.2.3 基于PCR与酶切相结合的分子标记  20-21
      1.5.2.4 基于单个核苷酸多态位点的分子标记  21-22
      1.5.2.5 其他分子标记  22-23
    1.5.3 分子标记技术的应用进展  23-26
      1.5.3.1 绘制指纹图谱和品种鉴定  23-24
      1.5.3.2 遗传多样性研究  24
      1.5.3.3 分子遗传图谱的构建  24-25
      1.5.3.4 分子标记辅助选择育种  25
      1.5.3.5 系谱分析和基因标记  25-26
      1.5.3.6 基因克隆  26
  1.6 本项研究的目的和意义  26-27
第二章材料与方法  27-37
  2.1 试验材料  27-28
  2.2 主要试验设备、试剂及所需溶液的配制  28-29
    2.2.1 主要试验设备  28
    2.2.2 主要试验试剂  28
    2.2.3 主要溶液的配制  28-29
  2.3 试验方法  29-37
    2.3.1 基因组DNA的提取、纯化与检测  29-32
      2.3.1.1 基因组DNA的提取和纯化  29-31
      2.3.1.2 杨梅基因组DNA的检测  31-32
    2.3.2 基因组DNA的RAPD-PCR扩增反应  32-33
      2.3.2.1 RAPD-PCR扩增反应体系及程序的初步建立  32-33
      2.3.2.2 RAPD-PCR扩增反应条件的优化  33
    2.3.3 RAPD-PCR扩增反应引物的筛选  33-35
    2.3.4 数据统计分析方法  35-37
第三章结果与分析  37-48
  3.1 DNA提取结果与质量检测  37-38
  3.2 RAPD-PCR最佳反应体系的建立  38-44
    3.2.1 Mg~(2+)浓度对PCR结果的影响  38-39
    3.2.2 dNTPs用量对PCR结果的影响  39-40
    3.2.3 引物浓度对PCR结果的影响  40
    3.2.4 Taq DNA聚合酶对PCR结果的影响  40-41
    3.2.5 模板DNA浓度对PCR结果的影响  41-42
    3.2.6 热循环参数对扩增结果的影响  42-43
    3.2.7 RAPD-PCR最佳反应体系与反应程序的确立  43-44
  3.3 RAPD引物筛选结果  44
  3.4 杨梅的RAPD遗传聚类分析  44-48
    3.4.1 RAPD扩增结果及条带统计  44-45
    3.4.2 RAPD特异引物和特异标记分析  45
    3.4.3 亲缘关系和遗传多样性分析  45-48
第四章讨论  48-53
  4.1 杨梅DNA的提取及纯度  48-49
  4.2 RAPD反应稳定性及影响因素  49
  4.3 多态性带的检出率及提高途径  49-50
  4.4 杨梅种质资源的遗传基础  50-51
  4.5 RAPD在杨梅育种上的应用价值  51-53
参考文献  53-61
致谢  61-62
附录  62-66

福建省杨梅不同品种的RAPD分析

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