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花脸香蘑(Lepista sordida)液体发酵及代谢产物的研究

作 者: 张京良
导 师: 江晓路
学 校: 中国海洋大学
专 业: 水产品加工及贮藏工程
关键词: 花脸香蘑 液体发酵 菌丝成分分析 代谢产物 功能食品
分类号: S646
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要


花脸香蘑是一种珍稀食药用菌,具有非常好的营养价值和生物活性,野生资源稀少、产量低,其价格极其昂贵,是一种很有开发潜力的野生菌种。本文对采集自青岛崂山的花脸香蘑进行菌种分离和鉴定,以菌丝体生物量为指标对其液体发酵条件进行优化,并对菌丝体及代谢产物进行分析,在此基础上初步研究花脸香蘑功能食品的研制,主要研究结果如下:通过组织分离法,分离得到花脸香蘑无性型;通过子实体、菌落、菌丝体形态观察和ITS区序列分析,推断该菌株为花脸香蘑(Lepista sordida),命名为花脸香蘑LS7 (Lepista sordida LS7)。以菌丝体生物量为指标,对花脸香蘑LS7的液体发酵条件进行优化,通过单因素实验确定了最佳碳源为葡萄糖,氮源为酵母膏;最佳发酵条件为:初始pH 6.5,培养温度25℃,接种量7%,250mL三角瓶装液100mL,发酵120小时;通过正交实验确定了最佳培养基组成为:土豆20%,葡萄糖3%,酵母膏0.6%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.02%,VB1 0.01%;通过优化,菌丝体生物量有了显著提高,明显缩短了发酵时间,在最适培养基和发酵条件下,菌丝体生物量达到25.40±0.25g/L,明显高于常见食用菌。对液体发酵菌丝体的成分进行分析,花脸香蘑菌丝体含水分12.0±0.9%,蛋白质30.2±1.2%,脂肪1.4±0.2%,粗纤维3.4±0.2%,灰分8.1±0.4%,具有高蛋白、低脂肪的特点;氨基酸含量为17.8%,氨基酸种类齐全且必需氨基酸和鲜味氨基酸含量高,符合FAO/WHO优质蛋白质的要求;花脸香蘑含有丰富的核苷类,主要包括腺苷,鸟苷和尿苷,含量分别是0.62%、0.17%、0.73%,核苷类总含量相对较高,而且所含有核苷含量与其他食用菌相比也较高;同时检测了花脸香蘑菌丝体的甘露醇含量,含量为6.25%,说明花脸香蘑是一种营养丰富,味道鲜美,具有多种生理活性的优质资源。对花脸香蘑LS7的代谢产物进行研究。通过液体发酵、乙醇沉淀、加水复溶等工艺得花脸香蘑EPS和IPS。EPS含糖量93.5%,还原糖含量为4.25%,蛋白含量微少,分子量约为77kDa,单糖组成为甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为3.9:1:0.1,糖苷键构型为β型;IPS含糖量91.3%,还原糖含量4.5%,蛋白含量3.96%,分子量约为84kDa,单糖组成为甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为1.8:1:0.1,糖苷键构型为a型。多糖抗氧化活性研究表明, EPS和IPS均具有清除羟基自由基的能力,且随着浓度的增加清除羟自由基的能力增强;两者均没有清除超氧阴离子的作用;随着浓度的增加,多糖的还原力增加。抗菌活性实验表明,EPS和IPS均无抗菌活性,胞外小分子物质有广泛的抗菌活性,对G+、G-细菌、酵母菌和霉菌都有很好的抑制作用,尤其是对植物致病菌黄瓜枯萎菌和辣椒炭疽菌效果明显。在对花脸香蘑营养成分和代谢产物活性研究的基础上,初步研究了花脸香蘑功能食品的研制,通过正交实验确定了:1)饮料的最佳配方为:花脸香蘑提取液浓度为50%,甜味剂(白砂糖)2%,酸味剂(柠檬酸)0.06%,稳定剂(海藻酸钠)0.05%;2)调味酱的最佳配方为:食盐1.5%、白糖1.25%、胡椒粉0.5%、姜粉0.5%、淀粉1%;3)调味料的最佳配方为:食盐15%,胡椒粉3%,味精2%。研制的食品营养丰富,具有独特的蘑菇香味及鲜味和多种生理活性。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-17
前言  17-44
  1 食用菌的研究进展  17-22
    1.1 食用菌概述  17
    1.2 食用菌的营养价值  17-18
    1.3 食用菌营养成分研究进展  18-20
    1.4 食用菌的药理作用  20-22
      1.4.1 抗肿瘤作用  20-21
      1.4.2 调节机体免疫功能  21
      1.4.3 降血脂作用  21-22
      1.4.4 抗病毒作用  22
      1.4.5 止咳平喘、祛痰作用  22
      1.4.6 保肝作用  22
  2 真菌多糖的抗氧化研究  22-25
    2.1 活性氧及其生理特性  22-23
    2.2 多糖抗氧化机理  23-24
    2.3 体外抗氧化能力的评价方法  24
    2.4 食用菌多糖抗氧化研究进展  24-25
  3 食用菌功能食品  25-27
    3.1 食用菌功能食品的加工形式  26
    3.2 食用菌功能食品开发的种类  26-27
  4 液体发酵技术  27-32
    4.1 液体发酵的优点  28-29
    4.2 液体发酵的营养要求和环境条件  29-31
      4.2.1 营养组分  29-30
      4.2.2 环境条件  30-31
    4.3 液体发酵的应用前景  31-32
  5 花脸香蘑研究进展  32-35
    5.1 花脸香蘑的生物学特性  32-33
      5.1.1 花脸香蘑的形态特征  32
      5.1.2 花脸香蘑的生长环境  32-33
    5.2 花脸香蘑的营养特征  33
    5.3 生物活性研究  33-34
    5.4 酶的研究  34-35
  6 立题依据和研究内容  35-37
    6.1 立题依据  35
    6.2 主要的研究内容  35-36
    6.3 技术路线  36-37
  参考文献  37-44
第一章 花脸香蘑的鉴定  44-53
  引言  44-45
  1 材料和方法  45-48
    1.1 仪器和试剂  45
      1.1.1 仪器  45
      1.1.2 试剂  45
    1.2 溶液配制  45-46
    1.3 培养基  46
    1.4 实验方法  46-48
      1.4.1 菌种的分离  46
      1.4.2 菌株的形态学研究  46-47
      1.4.3 菌株的分子生物学鉴定  47-48
  2 结果和分析  48-51
    2.1 子实体、菌落形态及菌丝特征  48
    2.2 PCR扩增结果  48-49
    2.3 ITS区序列分析  49-51
  3 小结  51-52
  参考文献  52-53
第二章 花脸香蘑LS7液体发酵条件优化  53-67
  引言  53
  1 材料和方法  53-56
    1.1 仪器和试剂  53-54
      1.1.1 仪器  53
      1.1.2 试剂  53-54
    1.2 菌种和培养基  54
      1.2.1 菌种  54
      1.2.2 培养基  54
    1.3 实验方法  54-56
      1.3.1 菌种的活化  54
      1.3.2 发酵  54
      1.3.3 菌丝体生物量的测定  54
      1.3.4 营养成分的优化  54-55
      1.3.5 发酵条件的优化  55-56
      1.3.6 数据处理  56
  2 结果与分析  56-63
    2.1 碳源对发酵的影响  56-57
    2.2 氮源对发酵的影响  57
    2.3 碳源、氮源及无机盐的正交实验结果  57-59
    2.4 温度对发酵的影响  59-60
    2.5 初始pH对发酵的影响  60-61
    2.6 接种量对发酵的影响  61-62
    2.7 装液量对发酵的影响  62
    2.8 发酵时间对发酵的影响  62-63
  3 小结  63-65
  参考文献  65-67
第三章 花脸香蘑LS7发酵菌丝体成分分析  67-89
  引言  67
  1 材料和方法  67-74
    1.1 仪器和试剂  67
      1.1.1 仪器  67
      1.1.2 试剂  67
    1.2 溶液配制  67-68
    1.3 原料  68
    1.4 实验方法  68-74
      1.4.1 水分含量测定  68-69
      1.4.2 灰分含量测定  69
      1.4.3 蛋白质含量测定  69-70
      1.4.4 粗脂肪含量测定  70
      1.4.5 粗纤维含量测定  70-71
      1.4.6 氨基酸分析  71-72
      1.4.7 核苷类含量分析  72-73
      1.4.8 甘露醇含量分析  73-74
  2 结果与分析  74-83
    2.1 基本成分分析  74-75
    2.2 氨基酸含量分析  75-78
      2.2.1 氨基酸组成分析  75-76
      2.2.2 鲜味氨基酸分析  76-77
      2.2.3 必需氨基酸组成的营养评价  77-78
    2.3 核苷类含量分析  78-81
    2.4 甘露醇含量分析  81-83
      2.4.1 标准曲线的绘制  81
      2.4.2 精密度实验结果  81-82
      2.4.3 稳定性实验结果  82
      2.4.4 回收率实验结果  82-83
      2.4.5 干扰实验结果  83
      2.4.6 花脸香蘑菌丝体甘露醇含量  83
  3 小结  83-86
  参考文献  86-89
第四章 花脸香蘑LS7代谢产物的研究  89-110
  引言  89-90
  1 材料和方法  90-96
    1.1 仪器和试剂  90
    1.2 菌种和培养基  90
    1.3 实验方法  90-96
      1.3.1 多糖及小分子物质的制备  90-92
      1.3.2 总糖的测定  92
      1.3.3 还原糖含量测定  92-93
      1.3.4 蛋白质含量测定  93
      1.3.5 多糖的凝胶柱层析  93-94
      1.3.6 分子量测定  94
      1.3.7 多糖的单糖组成分析  94-95
      1.3.8 紫外光谱分析  95
      1.3.9 红外光谱分析  95
      1.3.10 多糖的抗氧化活性  95-96
      1.3.11 多糖和胞外小分子的抗菌活性测定  96
  2 结果与分析  96-107
    2.1 基本理化性质  96
    2.2 总糖含量  96-97
    2.3 还原糖含量  97
    2.4 蛋白质含量测定  97-98
    2.5 多糖凝胶柱层析结果  98-99
    2.6 分子量测定结果  99-100
    2.7 多糖的单糖组分分析结果  100-102
      2.7.1 水解结果  100
      2.7.2 单糖组成分析结果  100-102
    2.8 紫外光谱结果  102
    2.9 红外光谱分析结果  102-104
    2.10 抗氧化活性结果  104-106
      2.10.1 清除羟自由基  104
      2.10.2 清除超氧阴离子  104-105
      2.10.3 还原力测定  105-106
    2.11 抗菌活性分析结果  106-107
  3 小结  107-108
  参考文献  108-110
第五章 花脸香蘑LS7功能食品的研制  110-123
  引言  110-111
  1仪器和材料  111
  2 功能饮料的研制  111-115
    2.1 实验方法  111-112
      2.1.1 加工工艺  111
      2.1.2 操作要点  111-112
    2.2 结果与分析  112-115
      2.2.1 风味确定  112-114
      2.2.2 稳定剂的选择  114
      2.2.3 产品指标  114-115
    2.3 结论  115
  3 调味品的研制  115-120
    3.1 花脸香蘑调味酱  115-118
      3.1.1 实验方法  115-116
      3.1.2 结果与分析  116-118
      3.1.3 产品质量标准  118
      3.1.4 结论  118
    3.2 花脸香蘑调味料  118-120
      3.2.1 实验方法  118
      3.2.2 分析与讨论  118-120
      3.2.3 产品的质量标准  120
      3.2.4 结论  120
  4 小结  120-122
  参考文献  122-123
结论、展望及创新点  123-126
致谢  126-127
个人简历及发表文章  127

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 菌类(食用菌)
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