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刺芹侧耳的细胞工程育种及栽培研究

作　者: 王蕾
导　师: 王谦
学　校: 河北大学
专　业: 微生物学
关键词: 刺芹侧耳 原生质体 菌种选育 液体发酵
分类号: S646
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


食用菌具有高蛋白,低脂肪的特点,属于“天然,营养,多功能”食品,符合近年来国际上对食品提出的“低盐,低糖,低脂肪,高蛋白”的新要求,随着人们对食用菌营养价值及药用价值的认识,食用菌育种工作也成为科研工作者关注的热点。原生质体技术是食用菌育种工作的重要方法之一,因其具有操作简单,容易获得,且对诱变因子较敏感等优点,被广泛应用于各种食用菌的育种工作中。本文以刺芹侧耳为出发菌株,通过原生质体技术结合紫外线诱变获得再生变异菌株269株,探索了适合刺芹侧耳原生质体形成与再生的条件,得出适宜条件为“菌龄96h,酶解温度30℃,酶解时间2 h,酶系统为1%纤维素酶+1%蜗牛酶的混合酶,在该条件下,刺芹侧耳原生质体产量达到较高水平,产量为1.75×107个/mL。再生过程中,以0.6 mol/L的甘露醇做渗稳剂,能使原生质体再生率达4.8%,明显优于蔗糖和MgSO4。由原生质体紫外诱变可知,刺芹侧耳原生质体对紫外线的作用非常敏感,低剂量就能达到较高致死率,致死率在70%-80%时,正变率较高,因此选择致死率80%,照射时间15 s为适宜的紫外诱变时间。通过对再生变异菌株长势、长速、拮抗程度等方面的实验,筛选出长速优于出发菌株的再生变异菌株。通过对再生菌株发酵过程中生物量、pH值、还原糖含量、胞外酶活性等指标的检测,筛选出一株长速快、生物量高、利用还原糖能力好、胞外酶活性高的的优良菌株08X-013,酯酶同工酶分析可知菌株08X-013谱带表达不同于出发菌株,表明该菌株发生了遗传变异,是一株发酵性能良好的再生变异菌株。通过栽培试验可知菌株08X-013满袋、现蕾、出菇时间均比出发菌株提前,生物学效率达到65.2%,与出发菌株相比,增产率达到了11.8%,各项农艺性状优良,是一株高产优质的再生变异菌株。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-11
第1章 文献综述  11-20
  1.1 引言  11
  1.2 食用菌产业的优势  11-13
    1.2.1 食用菌的营养及药用价值  11-12
    1.2.2 食用菌的经济价值  12-13
  1.3 刺芹侧耳概述  13-15
    1.3.1 刺芹侧耳营养及药用价值  14
    1.3.2 刺芹侧耳国内外研究现状  14-15
  1.4 食用菌育种技术  15-17
    1.4.1 自然选育  15-16
    1.4.2 诱变育种  16
    1.4.3 杂交育种  16-17
    1.4.4 基因工程育种  17
  1.5 食用菌的液体发酵  17-18
    1.5.1 液体菌种  17-18
    1.5.2 利用发酵产物制备药物,保健品等  18
    1.5.3 提取代谢产物  18
  1.6 酯酶同工酶技术  18-19
  1.7 本试验的内容  19-20
第2章 刺芹侧耳原生质体制备及再生条件研究  20-30
  2.1 引言  20
  2.2 实验材料  20-21
    2.2.1 供试菌株  20
    2.2.2 培养基  20
    2.2.3 实验试剂  20-21
    2.2.4 实验仪器  21
  2.3 实验方法  21-23
    2.3.1 酶液制备  21
    2.3.2 菌丝培养  21
    2.3.3 原生质体制备  21-22
    2.3.4 原生质体再生  22
    2.3.5 原生质体制备再生条件优化  22-23
    2.3.6 原生质体紫外诱变  23
  2.4 结果与分析  23-28
    2.4.1 原生质体的生成  23
    2.4.2 酶系统对刺芹侧耳原生质体产量的影响  23-24
    2.4.3 菌龄对刺芹侧耳原生质体产量的影响  24
    2.4.4 酶解温度对刺芹侧耳原生质体产量的影响  24-25
    2.4.5 酶解时间对刺芹侧耳原生质体产量的影响  25-26
    2.4.6 渗透压稳定剂对刺芹侧耳原生质体再生的影响  26
    2.4.7 紫外诱变时间对刺芹侧耳原生质体再生的影响  26-27
    2.4.8 刺芹侧耳原生质体制备的正交筛选实验  27-28
  2.5 小结  28-30
第3章 刺芹侧耳再生变异菌株的筛选  30-34
  3.1 引言  30
  3.2 实验材料  30-31
    3.2.1 供试菌株  30
    3.2.2 培养基  30
    3.2.3 实验仪器  30-31
  3.3 实验方法  31
    3.3.1 再生变异株的初筛  31
    3.3.2 再生变异株的复筛  31
  3.4 结果与分析  31-33
    3.4.1 刺芹侧耳再生变异株的初筛  31
    3.4.2 刺芹侧耳再生变异株的复筛  31-33
  3.5 小结  33-34
第4章 刺芹侧耳再生变异菌株液体发酵性能研究  34-43
  4.1 引言  34
  4.2 实验材料  34-35
    4.2.1 供试菌株  34
    4.2.2 培养基  34-35
    4.2.3 实验试剂  35
    4.2.4 实验仪器  35
  4.3 实验方法  35-38
    4.3.1 再生变异株在液体培养基中的初筛  35-36
    4.3.2 再生变异株在液体培养基中的复筛  36-38
  4.4 结果与分析  38-42
    4.4.1 再生变异株在液体培养基中的初筛  38-39
    4.4.2 再生变异株在液体培养基中的复筛  39-42
  4.5 小结  42-43
第5章 刺芹侧耳再生变异菌株栽培研究  43-47
  5.1 引言  43
  5.2 实验材料  43
    5.2.1 供试菌株  43
    5.2.2 培养基  43
  5.3 实验方法  43
  5.4 结果与分析  43-46
    5.4.1 复筛菌株生长周期比较  43-44
    5.4.2 复筛菌株产量比较  44
    5.4.3 复筛菌株农艺性状比较  44-46
  5.5 小结  46-47
第6章 刺芹侧耳再生变异菌株酯酶同工酶分析  47-51
  6.1 引言  47
  6.2 实验材料及仪器  47
    6.2.1 供试菌株  47
    6.2.2 实验仪器  47
  6.3 实验方法  47-50
    6.3.1 试剂配制  47-48
    6.3.2 样品制备  48
    6.3.3 分离胶的制备  48-49
    6.3.4 浓缩胶的制备  49
    6.3.5 电泳  49
    6.3.6 取胶  49
    6.3.7 染色  49
    6.3.8 数据处理  49-50
  6.4 结果与分析  50
  6.5 小结  50-51
结论  51-53
参考文献  53-57
致谢  57

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 菌类（食用菌）
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