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狂犬病弱毒疫苗Flury-lep株生物学特性检测与分析

作　者: 罗世民
导　师: 陈铁桥；胡辉
学　校: 湖南农业大学
专　业: 临床兽医
关键词: 狂犬病疫苗 Ftury-lep毒株生态学特征
分类号: S855.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

狂犬病(Rabies)的防控以免疫接种为主,常用的狂犬病疫苗主要为弱毒活苗,我国的狂犬病弱毒活苗的种毒一般为Flury-lep株。因此有必要对狂犬病毒Flury-lep株的生态学特征进行全面评价,为确保并提高我国狂犬病疫苗的质量积累数据。本研究采用扫描电镜技术对分别以BHK-21细胞、鸡胚和小鼠大脑培养的狂犬病毒Flury-lep株的形态进行观察。在电子显微镜下,病毒粒子的尖端呈钝圆或尖锐的弧形,而病毒粒子的底端平齐。狂犬病毒颗粒形似子弹状或锥状。在细胞、鸡胚和小鼠大脑培养物中狂犬病毒Flury-lep株大体形态一致,均为子弹状或锥状,但仍有一些细小的差异,电镜图片显示：BHK-21细胞培养和鸡胚培养的狂犬病毒Flury-lep株形似子弹状,而小鼠大脑培养的狂犬病毒Flury-lep株大多数形似锥状,也有不少病毒粒子形似子弹状。BHK-21细胞培养和鸡胚培养的狂犬病毒Flury-lep株的病毒粒子形态大小较为一致,而小鼠大脑培养的狂犬病毒Flury-lep株的病毒粒子形态大小差异较大。不同培养物中病毒粒子的大小差异明显。从不同培养物中狂犬病毒Flury-lep株的病毒粒子形态大小来比较分析,狂犬病毒Flury-lep株的病毒粒子形态是较为稳定的,其中从形态的大小和同一培养物中病毒粒子形态的一致性来看,应用狂犬病毒Flury-lep株来制备狂犬病疫苗最好用BHK-21细胞培养增殖狂犬病毒Flury-lep毒株。本研究检测了分别以BHK-21细胞和鸡胚培养的狂犬病毒Flury-lep株对鹅红细胞的血凝性。用BHK-21细胞和鸡胚增殖的狂犬病毒Flury-lep毒株,在4℃下进行HA试验,结果表明：Flury-lep毒在4℃时能凝集鹅红细胞,BHK-21细胞培养物的HA效价整齐且效价较高,四份样品的HA效价为1：256、1：256、1：256、1：256；鸡胚培养物的HA效价亦价位整齐且效价较低,四份样品的HA效价为1：16、1：8、1：8、1:8。从结果来看,BHK-21细胞培养物中的病毒含量高,血凝效价高,比较起来,用BHK-21细胞和鸡胚增殖的狂犬病毒Flury-lep毒株无论是病毒的增殖效率还是所增殖培养病毒糖蛋白的活性都存在显著差异,用BHK-21细胞增殖狂犬病毒Flury-lep毒株优于用鸡胚增殖狂犬病毒Flury-lep毒株。因此,制备狂犬病毒Flury-lep毒株弱毒疫苗时,宜选用BHK-21细胞增殖狂犬病毒Flury-lep毒株。本研究对狂犬病毒Flury-lep的糖蛋白基因和氨基酸序列克隆测序后与其他狂犬病毒株的的糖蛋白基因和氨基酸序列进行同源性比对。根据所测序的狂犬病毒Flury-lep毒株糖蛋白的基因核苷酸序列,利用DNAstar软件推导出狂犬病毒Flury-lep毒株糖蛋白的氨基酸序列。比较了Flury-lep糖蛋白基因和10个常见的狂犬病毒株的糖蛋白基因核苷酸序列及推导的狂犬病毒糖蛋白氨基酸序列同源性比较结果,其核苷酸序列同源性为90.2%-97.5%,氨基酸同源性为90.4%-95.4%。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章狂犬病毒及狂犬病疫苗研究进展  8-16
  1 狂犬病毒研究进展  8-13
  2 狂犬病疫苗研究进展  13-16
第二章疫苗毒Flury-lep株形态观察  16-25
  1 实验材料  16-17
  2 实验方法  17-20
  3 结果与分析  20-23
  4 讨论  23-25
第三章疫苗毒Flury-lep株血凝性检测  25-33
  1 材料  25-26
  2 方法  26-29
  3 结果与分析  29-31
  4 讨论  31-33
第四章 Flury-lep株糖蛋白抗原比较分析  33-45
  1 材料  33-36
  2 实验方法  36-39
  3 结果与分析  39-43
  4 讨论  43-45
第五章结论  45-47
参考文献  47-51
英文缩略词表  51-52
致谢  52-53
作者简介  53

狂犬病弱毒疫苗Flury-lep株生物学特性检测与分析

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